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川崎病の病態における好中球細胞外トラップ(NETs)の関与とその制御機構の解明

Research Project

Project/Area Number 16K10082
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

Allocation TypeMulti-year Fund
Section一般
Research Field Pediatrics
Research InstitutionNational Defense Medical College

Principal Investigator

竹下 誠一郎  防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究施設、病院並びに防衛, その他, 教授 (50369542)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 川村 陽一  防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究施設、病院並びに防衛, 小児科学, 助教 (10648801)
野々山 恵章  防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究施設、病院並びに防衛, 小児科学, 教授 (40280961)
Project Period (FY) 2016-04-01 – 2020-03-31
Project Status Granted (Fiscal Year 2018)
Budget Amount *help
¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000)
Fiscal Year 2018: ¥650,000 (Direct Cost: ¥500,000、Indirect Cost: ¥150,000)
Fiscal Year 2017: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Fiscal Year 2016: ¥2,860,000 (Direct Cost: ¥2,200,000、Indirect Cost: ¥660,000)
Keywords川崎病 / 血管炎 / 好中球細胞外トラップ / NETosis
Outline of Annual Research Achievements

近年、好中球細胞外トラップ(neutrophil extracellular traps, NETs)という新たな細胞外殺菌機構が発見され、核内のクロマチンで構成される網目状の構造物に好中球elastase(NE)やmyeloperoxidase(MPO)などの抗菌蛋白を付着させて細胞外に放出することによって病原微生物を捕捉・殺菌するとされる。この過程は従来のnecrosisやapoptosisとは異なるタイプの細胞死ということでNETosisと名付けられた。NETosisに伴って細胞外に放出されたDNAやヒストン及び抗菌蛋白は生体防御機構に関与する反面、強力な組織傷害性を発揮することも知られている。NETsの放出によって血管内皮細胞傷害が引き起こされるとともに、血小板が活性化されて血栓形成の原因となりうる。
我々は、川崎病(Kawasaki disease, KD)の病態におけるNETsの関与を検証するため、①まずKD急性期の患児から分離した好中球をin vitroで培養し、HoechetによるDNA染色、MPO染色、NE染色によってNETs形成数を蛍光顕微鏡でカウントした結果、KD急性期のNETs形成は回復期や健常コントロールに比較して有意に高値を認めた。②次に、NETosisに伴い細胞外に放出されたcell-free DNAを培養上清から精製し、DNA中のハウスキーピング遺伝子であるリボヌクレアーゼPを標的としたリアルタイムPCRを実施してcell-free DNAの絶対定量を行った結果、KD急性期は健常コントロールに比較して有意に高値であった。③さらに、NETosisに伴い細胞外に放出されたDNAに付着した好中球エラスターゼを培養上清から抽出し、NEを標的としたELISAで測定した結果、同様にKD急性期は健常コントロールに比較して有意に高値であった。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

川崎病(Kawasaki disease, KD)の病態におけるNETsの関与を検証するためには、KD急性期の患児の末梢血から分離した好中球をin vitroで培養し、免疫染色(HoechetによるDNA染色、MPO染色、NE染色)する必要がある。好中球の寿命は短いため採血後すぐに処理する必要があり、夜間や休日等に入院した患児からの検体を得られない場合がある。また、KD患児のほとんどは1歳前後の乳幼児であるため、1回の採血量は数mlに限られ、十分な好中球数を得られない場合も多い。当院では年間40例近いKD患児の入院があるが、現時点で得られたデータは28例前後である。さらに、対照群として健常コントロール群が必要になるが、informed consentを得る必要があるため、現時点では数例のみである。
従って、現時点では論文にまとめるまでの症例数には達しておらず、3年目が終了した現在までの進捗状況は、当初の計画に比べて「遅れている」。

Strategy for Future Research Activity

研究自体は良好な結果が得られつつあるため、基本的な方針は今後も変更しない予定である。研究の対象患児数がなかなか集まらない現状に対する方策として、①研究グループとして、夜間や休日等に入院した患児からの検体にも対応できる体制を作る、②周辺の関連病院や医療機関に協力を呼び掛けてKDの検体を得る、③対照群である健常コントロール群のデータ数を増やすことを考えている。さらに、平成30年度から研究助手を雇用して、研究全体の進行を早めている。

Report

(3 results)
  • 2018 Research-status Report
  • 2017 Research-status Report
  • 2016 Research-status Report

Research Products

(20 results)

All 2018 2017 2016

All Journal Article Presentation Book

  • [Journal Article] A comparison of the predictive validity of the combination of the neutrophil-to-lymphocyte ratio and platelet-to-lymphocyte ratio and other risk scoring systems for intravenous immunoglobulin (ivig)-resistance in Kawasaki disease.2017

    • Author(s)
      Takeshita Seiichiro, Kanai Takashi, Kawamura Yoichi, Yoshida Yusuke, Nonoyama Shigeaki
    • Journal Title

      PLoS One

      Volume: 12

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0176957

    • Related Report
      2017 Research-status Report
    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] The role of neutrophil activation in the pathogenesis of Kawasaki disease2017

    • Author(s)
      Takeshita Seiichiro, Kawamura Yoichi, Kanai Takashi,Yoshida Yusuke, Nonoyama Shigeaki
    • Journal Title

      Pediatric Infectious Disease

      Volume: 3 Pages: 1-4

    • Related Report
      2017 Research-status Report
    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Urinary Lactate Dehydrogenase Activity and Its Isozyme Patterns in Kawasaki Disease2017

    • Author(s)
      Kawamura Yoichi, Takeshita Seiichiro, Kanai Takashi, Takizawa Mari, Yoshida Yusuke, Tsujita Yuki, Nonoyama Shigeaki
    • Journal Title

      International Journal of Pediatrics

      Volume: 2017 Pages: 1-6

    • DOI

      10.1155/2017/4162597

    • Related Report
      2016 Research-status Report
    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] The Combined Usefulness of the Neutrophil-to-Lymphocyte and Platelet-to-Lymphocyte Ratios in Predicting Intravenous Immunoglobulin Resistance with Kawasaki Disease2016

    • Author(s)
      Kawamura Yoichi, Takeshita Seiichiro, Kanai Takashi, Yoshida Yusuke, Nonoyama Shigeaki
    • Journal Title

      Journal of Pediatrics

      Volume: 178 Pages: 281-284

    • DOI

      10.1016/j.jpeds.2016.07.035

    • Related Report
      2016 Research-status Report
    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Presentation] Trial of ulinastatin treatment for a murine model of Kawasaki Disease2018

    • Author(s)
      Tsujita Yuki, Kanai Takashi, Yoichi Kawamura, Nonoyama Shigeaki, Takeshita Seiichiro
    • Organizer
      The 12th International Kawasaki Disease Symposium
    • Related Report
      2018 Research-status Report
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Involvement of neutrophil extracellular traps in the pathogenesis of Kawasaki disease2018

    • Author(s)
      Yoshida Yusuke, Takeshita Seiichiro, Kawamura Yoichi, Kanai Takashi, Tsujita Yuki, Nonoyama Shigeaki
    • Organizer
      The 12th International Kawasaki Disease Symposium
    • Related Report
      2018 Research-status Report
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] 好中球細胞外トラップ(NETs)の川崎病の病態への関与2018

    • Author(s)
      吉田裕輔、竹下誠一郎、川村陽一、金井貴志、辻田由喜、野々山恵章
    • Organizer
      第121回日本小児科学会学術集会
    • Related Report
      2018 Research-status Report
  • [Presentation] 好中球/リンパ球比,血小板/リンパ球比によるIVIG不応の予測に関する多施設共同研究2018

    • Author(s)
      金井貴志、竹下誠一郎、川村陽一、木下恵司、中谷圭吾、岩島覚、瀧澤裕司、廣野恵一、森一越、吉田裕輔、野々山恵章
    • Organizer
      第121回日本小児科学会学術集会
    • Related Report
      2018 Research-status Report
  • [Presentation] ウリナスタチン併用療法プロトコールにおける冠動脈病変合併例の予後検討2018

    • Author(s)
      金井貴志、川村陽一、吉田裕輔、大澤麻登里、竹下誠一郎、野々山恵章
    • Organizer
      第38回日本川崎病学会・学術集会
    • Related Report
      2018 Research-status Report
  • [Presentation] 川崎病のIVIG不応予測因子としての好中球-リンパ球比と血小板-リンパ球比の有用性2017

    • Author(s)
      川村陽一, 金井貴志, 辻田由喜, 吉田裕輔, 竹下誠一郎, 野々山恵章
    • Organizer
      第120回日本小児科学会学術集会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2017-04-15
    • Related Report
      2016 Research-status Report
  • [Presentation] 川崎病のIVIG不応予測因子としての好中球-リンパ球比と血小板-リンパ球比の有用性2017

    • Author(s)
      川村陽一、金井貴志、辻田由喜、吉田裕輔、竹下誠一郎、野々山恵章
    • Organizer
      第120回日本小児科学会学術集会
    • Related Report
      2017 Research-status Report
  • [Presentation] 川崎病急性期のIVIG不応予測における好中球/リンパ球比、血小板/リンパ球比の有用性:他のリスクスコアとの比較2017

    • Author(s)
      川村陽一、竹下誠一郎、金井貴志、辻田由喜、吉田裕輔、野々山恵章
    • Organizer
      第53回日本小児循環器学会総会・学術集会
    • Related Report
      2017 Research-status Report
  • [Presentation] 川崎病の病態における好中球細胞外トラップ(NETs)の関与について2017

    • Author(s)
      吉田裕輔、竹下誠一郎、川村陽一、金井貴志、辻田由喜、野々山恵章
    • Organizer
      第37回日本川崎病学会・学術集会
    • Related Report
      2017 Research-status Report
  • [Presentation] 好中球/リンパ球比、血小板/リンパ球比によるIVIG不応の予測に関する多施設共同研究2017

    • Author(s)
      金井貴志、竹下誠一郎、川村陽一、木下恵司、中谷圭吾、岩島覚、瀧澤裕司、廣野恵一、森一越、吉田裕輔、野々山恵章
    • Organizer
      第37回日本川崎病学会・学術集会
    • Related Report
      2017 Research-status Report
  • [Presentation] CAWS誘導川崎病類似マウス血管炎に対するウリナスタチンの効果について2017

    • Author(s)
      辻田由喜、金井貴志、吉田裕輔、川村陽一、三浦典子、大野尚仁、野々山恵章、竹下誠一郎
    • Organizer
      第37回日本川崎病学会・学術集会
    • Related Report
      2017 Research-status Report
  • [Presentation] 川崎病急性期の好中球/リンパ球比、血小板/リンパ球比はIVIG治療抵抗性の予測因子になりうるか?2016

    • Author(s)
      川村陽一, 金井貴志, 辻田由喜, 吉田裕輔, 竹下誠一郎, 野々山恵章
    • Organizer
      第52回日本小児循環器学会総会・学術集会
    • Place of Presentation
      東京
    • Related Report
      2016 Research-status Report
  • [Presentation] 川崎病急性期の好中球-リンパ球比、血小板-リンパ球比はIVIG 治療不応性の予測因子である2016

    • Author(s)
      金井貴志, 川村陽一, 辻田由喜, 吉田裕輔, 竹下誠一郎, 野々山恵章
    • Organizer
      第36回日本川崎病学会・学術集会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Related Report
      2016 Research-status Report
  • [Presentation] CAWS誘導血管炎に対するウリナスタチン投与の検討2016

    • Author(s)
      辻田由喜, 金井貴志, 吉田裕輔, 川村陽一, 竹下誠一郎, 三浦典子, 大野尚仁, 野々山恵章
    • Organizer
      第60回日本医真菌学会総会・学術集会
    • Place of Presentation
      東京
    • Related Report
      2016 Research-status Report
  • [Book] Vasculitis (eBook), Chapter 1: Update on the immunomodulatory therapy for Kawasaki disease2017

    • Author(s)
      Takeshita Seiichiro, Kawamura Yoichi, Kanai Takashi
    • Publisher
      Avid Science
    • Related Report
      2017 Research-status Report
  • [Book] Kawasaki Disease. Current understanding of the mechanism and evidence-based treatment.2016

    • Author(s)
      Takeshita Seiichiro, Kawamura Yoichi, Kanai Takashi
    • Total Pages
      552
    • Publisher
      Springer
    • Related Report
      2016 Research-status Report

URL: 

Published: 2016-04-21   Modified: 2019-12-27  

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