Study on transmission of Abeta aggregates and its prevention
| Project/Area Number |
17H04194
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
|
| Allocation Type | Single-year Grants |
|---|
| Section | 一般 |
|---|
| Research Field |
Neurology
|
|---|
| Research Institution | Kanazawa University |
|---|
Principal Investigator |
山田 正仁 金沢大学, 医学系, 教授 (80191336)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
濱口 毅 金沢大学, 医学系, 講師 (70452109)
坂井 健二 金沢大学, 附属病院, 助教 (00572306)
池田 篤平 金沢大学, 医学系, 協力研究員 (30755773)
中山 隆宏 金沢大学, ナノ生命科学研究所, 准教授 (00532821)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2021-03-31
|
| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2020)
|
| Budget Amount *help |
¥16,770,000 (Direct Cost: ¥12,900,000、Indirect Cost: ¥3,870,000)
Fiscal Year 2020: ¥2,470,000 (Direct Cost: ¥1,900,000、Indirect Cost: ¥570,000)
Fiscal Year 2019: ¥3,250,000 (Direct Cost: ¥2,500,000、Indirect Cost: ¥750,000)
Fiscal Year 2018: ¥5,200,000 (Direct Cost: ¥4,000,000、Indirect Cost: ¥1,200,000)
Fiscal Year 2017: ¥5,850,000 (Direct Cost: ¥4,500,000、Indirect Cost: ¥1,350,000)
|
|---|
| Keywords | アルツハイマー病 / アミロイドβタンパク / 凝集 / 伝播 / 防御 / アミロイドβ蛋白 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
[1]Aβ seedsの準備
1.In vitro Aβ凝集系による各種Aβ凝集体作成：In vitro凝集系を用いて、合成Aβ1-40及びAβ1-42ペプチドよりAβ凝集体を作成した。2. ADモデル動物脳由来Aβ seedsの準備：脳Aβアミロイドーシスモデルの脳ホモジネートをin vitro凝集系のseedsとして用いる方法を確立した。3. ヒト脳由来Aβ seedsの準備：ADや脳アミロイドアンギオパチー（CAA）などの高齢者300剖検例のAβ病理を評価し、Aβ沈着パターン別に群をつくり、それらの脳ホモジネート/不溶性Aβ分画等を準備した。
[2] 各種Aβ seedsに対する処理
Aβ凝集体に対して、手術器具の滅菌に用いるオートクレーブ処理を施す方法を確立した。In vitroで形成させたAβ凝集体（液中および乾燥物）及びマウス脳ホモジネートに対して様々な条件でオートクレーブ処理あるいはγ線照射処理を施し、以下の実験に供した。
[3] In vitro Aβ 凝集系における各種Aβ seeds（処理前・処理後）のseeding effects
オートクレーブ処理前後のAβ seedsの、in vitro Aβ凝集系におけるseeding effectsをチオフラビンT（ThT）法による継時的モニタリング、円偏光二色性スペクトル測定、電子顕微鏡等で評価し、seeding 効果は、オートクレーブの処理時間や温度に依存して低下することを明らかにした。一方、γ線照射処理は、未処理のAβ凝集体を用いた凝集実験と同様の結果であり効果はなかった。さらに、世界最速の高速原子間力顕微鏡 (HS-AFM)を用いて、合成Aβ1-42凝集体seedsに対するオートクレーブ処理が引き起こすAβ凝集形態・動態の変化を観察するための条件を確立し、単一凝集体レベルでの観察・解析を行っている。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
オートクレーブ処理によるAβ凝集体の形態学的変化やseeding効果の変化をThT解析や円偏光二色性スペクトル測定にて解析の結果、Aβ凝集体のseeding 効果は、オートクレーブの処理時間や温度に依存して低下することが明らかになった。これらの結果は再現性のある実験データに基づくものであり、各種Aβ seedsのin vitroでのseeding効果を消失させる条件が明らかになった。現在、Aβ seedsのオートクレーブ処理の in vivoでの効果を確立するためのマウスモデル（R1.40マウス）を用いた実験の準備中である。
|
| Strategy for Future Research Activity |
令和元年度は下記の計画を推進する。
[1] 各種Aβ seedsの準備とin vitro凝集系におけるオートクレーブ処理効果の確認 [池田、中山、浜口、山田ほか]：in vitro凝集系による各種Aβ凝集体（野生型ばかりでなく変異型Aβを含む）、ADモデル動物及びヒト脳から抽出した不溶性Aβ分画をAβ seedsとして用意し、昨年度in vitroでseeding防御効果を認めたオートクレーブ法を用い上記Aβ seedsを処理し至適条件を確認する。
[2] In vitro Aβ 凝集系における各種Aβ seedsの処理前後の比較 [池田、中山、山田ほか]：HS-AFMでseeding effectsの処理前後の凝集形態・動態の変化を詳細に観察する。
[3] ADモデル動物における各種Aβ seedsのseeding effectsの処理前後の変化 [浜口、坂井、山田ほか]：マウス脳及びヒト脳ホモジネートのオートクレーブ処理前後のサンプルをR1.40マウスに接種し、オートクレーブ処理の効果をin vivoで確認する。
|
Report
(2 results)
Research Products
(15 results)
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
[Presentation] Iatrogenic Creutzfeldt-Jakob disease related to dura mater grafts2017
Author(s)
Yamada M, Hamaguchi T, Sakai K, Noguchi-Shinohara M, Nozaki I, Taniguchi Y, Kobayashi A, Takeuchi A, Kitamoto T, Nakamura Y, Sanjo N, Tsukamoto T, Takao M, Murayama S, Iwasaki Y, Yoshida M, Shimizu H, Kakita A, Takahashi H, Suzuki H, Naiki H, Mizusawa H
Organizer
PRION2017
Related Report
Int'l Joint Research / Invited
-
-
[Presentation] Possible human-to-human transmission of cerebral β-amyloidosis via cadaveric dura mater grafting2017
Author(s)
Yamada M, Hamaguchi T, Taniguchi Y, Sakai K, Kitamoto T, Takao M, Murayama S, Iwasaki Y, Yoshida M, Shimizu H, Kakita A, Takahashi H, Suzuki H, Naiki H, Sanjo N, Mizusawa H
Organizer
Alzheimer's Association International Conference (AAIC) 2017
Related Report
Int'l Joint Research
-
-
-
