ゲノム解析によるカンキツグリーニング病原細菌と宿主相互作用の解明

• Project/Area Number: 18780033
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Plant pathology
• Research Institution: National Agricultural Research Organization
• Principal Investigator: 宮田 伸一 National Agricultural Research Organization, 果樹研究所・カンキツグリーニング病研究チーム, 主任研究員 (00313015)
• Project Period (FY): 2006 – 2007
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2007)
• Budget Amount: ¥3,400,000 (Direct Cost: ¥3,400,000); Fiscal Year 2007: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000); Fiscal Year 2006: ¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000)
• Keywords: カンキツグリーニング病 / 罹病ニチニチソウ / ランダムクローニング

Research Abstract

昨年までに,カンキツグリーニング病を罹病させたニチニチソウの主脈を用いて、Cα. L. asiaticusの濃縮画分からの抽出DNAを用い,ゲノムDNA増幅キットによってゲノムDNAの増幅の後,プラスミドベクターにショットガンクローニングして塩基配列決定を行った。今年度は本クローニング手法を繰り返し実行し,その結果,第1段階スクリーニングによってα-プロテオバクテリア由来の配列に分類されるクローンを選抜し,さらにPCRによる第2段階スクリーニングを行って陽性クローンについては全塩基配列を改めて決定した。
これらの陽性クローンの塩基配列情報を元に疎水性領域をもつものを探索したが,膜タンパク質のようにトランスメンブレンドメイン(疎水性領域と親水性領域が咬互に存在する)を持つものは見つからなかった。またドメインデータベースに対して検索を行ったところ、細胞外にSecシステムやABCトランスポーターによって輸送されるようなシグナルドメインをもつものも存在しなかった。しかし細胞外からの熱・浸透圧・イオン濃度などの刺激を受容して遺伝子発現制御を行うシグナル伝達系である二成分制御系因子の受容体であるSensor Kinase候補が存在したため,今後は全長配列の決定に向けてTail-PCR法やGenomic Walker Kitなどによる隣接領域の取得を試み、さらにペアとなるReceiver Domainの候補遺伝子の探索に取り組む。

Research Products

• [Journal Article] Molecular and serological characterization of cucumber mottle virus, a new cucurbit-infecting Tobamo-like virus. (2007)
  • Author(s): Orita, H., Sakai, J., Kubota, K., Okuda, M., Tanaka, Y., Hanada, K., Imamura, Y., Nishiguchi, M., Karasev, A., Miyata, S. and Iwanami, T.
  • Journal Title: Plant Disease 91 Pages: 1574-1578
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Apple aminopropyl transferase, MdACL5 interacts with putative elongation factor 1-a and S-adenosylmethionine synthase. (2007)
  • Author(s): He, L., Ban, Y., Miyata, S., Kitashiba, H. and Moriguchi, T.
  • Journal Title: Biochem. Biophys. Res. Commun. 366 Pages: 162-167
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Positive selection acting on a surface membrane protein of the plant-pathogenic phytoplasmas. (2006)
  • Author(s): Kakizawa S, Oshima K, Jung HY, Suzuki S, Nishigawa H, Arashida R, Miyata S, Ugaki M, Kishino H, Namba S
  • Journal Title: Journal of Bacteriology 118 Pages: 3424-3428
• [Presentation] カンキツグリーニング病原細菌日本株のファージ様DNAポリメラーゼ遺伝子領域の解析 (2007)
  • Author(s): 岩波徹・冨村健太・古屋典子・宮田伸一・濱島朗子・烏越博明・村山裕子・河野伸二・奥田充
  • Organizer: 九州病害虫研究会秋季(第74回)研究発表会
  • Place of Presentation: 鹿児島県
  • Year and Date: 2007-10-31
• [Presentation] 東アジアから採集したミカンキジラミの個体識別 (2007)
  • Author(s): 冨村健太・井上広光・芦原亘・古屋典子・宮田伸一・松比良邦彦・安田慶次・岩波徹
  • Organizer: 九州病害虫研究会秋季(第74回)研究発表会
  • Place of Presentation: 鹿児島県
  • Year and Date: 2007-10-31
• [Presentation] 台湾のカンキツグリーニング病には塩基配列に変異を持つ病原力変異株が存在する (2007)
  • Author(s): 宮田伸一・冨村健太・古屋典子・蘇 鴻基・岩波徹
  • Organizer: 平成19年度 日本植物病理学会関東部会
  • Place of Presentation: 東京農業大学
  • Year and Date: 2007-09-15
• [Presentation] カンキツグリーニング病原細菌の台湾分離株と日本分離株との間に認められた遺伝的変異 (2007)
  • Author(s): 古屋典子・宮田伸一・冨村健太・久保田健嗣・奥田充・蘇鴻基・岩波徹
  • Organizer: 平成19年度 日本植物病理学会関東部会
  • Place of Presentation: 東京農業大学
  • Year and Date: 2007-09-15
• [Presentation] カンキツグリーニング病原細菌のファージ様DNAポリメラーゼ遺伝子領域による東南アジア産分離株の塩基配列の比較 (2007)
  • Author(s): 冨村健太・古屋典子・宮田伸一・久保田健嗣・奥田充・Siti Subandiyah・岩波徹
  • Organizer: 平成19年度 日本植物病理学会関東部会
  • Place of Presentation: 東京農業大学
  • Year and Date: 2007-09-15