野生鳥類の非侵襲的抗体検出法を用いた鳥インフルエンザウイルス国内侵入リスク評価

• Project/Area Number: 18H02346
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 一般
• Review Section: Basic Section 42020:Veterinary medical science-related
• Research Institution: Tottori University
• Principal Investigator: 伊藤 壽啓 鳥取大学, 農学部, 教授 (00176348)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Project Status: Granted (Fiscal Year 2020)
• Budget Amount: ¥11,050,000 (Direct Cost: ¥8,500,000、Indirect Cost: ¥2,550,000); Fiscal Year 2020: ¥3,380,000 (Direct Cost: ¥2,600,000、Indirect Cost: ¥780,000); Fiscal Year 2019: ¥3,250,000 (Direct Cost: ¥2,500,000、Indirect Cost: ¥750,000); Fiscal Year 2018: ¥4,420,000 (Direct Cost: ¥3,400,000、Indirect Cost: ¥1,020,000)
• Keywords: 高病原性鳥インフルエンザ / 野生水禽類 / 糞便抗体 / 非侵襲性 / インフルエンザウイルス / 野鳥

Outline of Annual Research Achievements

本研究では鳥類の腸管内の分泌型IgAに着目し、糞便から特異IgA抗体を検出するという極めて非侵襲的な方法を確立し、その手法を用いて、国内野鳥の抗体保有状況を調査することを目的とした。 今年度は2012-2013年に国内各地で採取された渡りガモの糞便(177検体)および血清(100検体)を用いて、当時の国内に飛来した渡りガモの抗体保有状況調査を調べた。H5亜型株およびH9亜型株をそれぞれ抗原とした血球凝集阻止（HI）試験を実施した結果、177検体中5羽のカモ（オナガガモ4羽、及びハシビロガモ1羽）の血清において家禽由来H9ウイルスに対するHI活性（HI価1:8-16）が認められた。すなわち、今回調査したカモ類のH9ウイルスに対する抗体陽性率は2.8%であった。さらに別のオナガガモ1羽及びキンクロハジロ1羽の血清で、家禽由来H5ウイルスに対するHI抗体（HI価1:8）が認められた。すなわち、今回調査したカモ類のH5ウイルスに対する抗体陽性率は1.1%であった。
次に各種野鳥の糞便中のIgA抗体を検出するために、それぞれの宿主の２次抗体を必要としない競合ELISA法の確立を試みた。まず、使用する抗原及び競合抗体の至適濃度を決定した後、その条件下で実験感染7、10、14日目の感染アイガモの糞便から抽出したIgA抗体を用いてH5ウイルスに対する競合ELISAを実施したが、いずれの個体においてもH5HAに対する特異抗体は検出されなかった。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

昨年度はカモの糞便に由来する鳥インフルエンザウイルス特異IgA 抗体を検出するための、酵素標識免疫固相法(ELISA 法) を確立することができた。それを受けて、今年度はカモ以外の鳥種の糞便からもIgAの検出が可能となる競合ELISA法の確立を目指したが、カモの感染実験材料および野外糞便材料どちらを用いた場合でも、特異IgA抗体の検出は困難であった。したがって、次年度は本法の特異度ならびに感度を上げることを中心に、改良を加えるとともに、計画当初に考えていた代替え法としての異なる鳥種のIgAを用いたELISA法の確立を目指す計画である。

Strategy for Future Research Activity

最終年度は、競合ELISA法の確立を目指して、鳥の糞便中に存在する可能性のあるインヒビターの除去や、検体中のIgA抗体を簡便な方法で濃縮する方法、あるいはELISAの検出感度を上げる手法などを今後、さらに検討する必要があると考えている。また上述の通り、代替え法としての各種鳥類のIgAを用いた直接ELISA法の検討のために、まずは胆嚢からのIgA抽出精製ならびに、抗IgA抗体の作出から行う計画である。