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酵母発現系を用いた病原菌エフェクターの網羅的スクリーニングシステムの開発

Research Project

Project/Area Number 19658035
Research Category

Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Applied microbiology
Research InstitutionKawasaki Medical School

Principal Investigator

岸 文雄  Kawasaki Medical School, 医学部, 教授 (40153077)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 田淵 光昭  川崎医科大学, 医学部, 講師 (00294637)
Project Period (FY) 2007 – 2009
Project Status Completed (Fiscal Year 2009)
Budget Amount *help
¥3,400,000 (Direct Cost: ¥3,400,000)
Fiscal Year 2009: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 2008: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
Fiscal Year 2007: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
Keywords肺炎クラミジア / エフェクター / 病原菌 / III型分泌装置 / 病原因子 / スクリーニング / 酵母
Research Abstract

本研究では、酵母発現系を用いたChlamydophila pneumoniae(C.pneumoniae)エフェクターの網羅的スクリーニングシステムの開発を目的に研究を行った。Tet-offプロモーターにより発現の調節が可能である酵母発現ベクターに組込んだアレイライブラリーを作製し、酵母の増殖抑制を指標にC.pneumoniae J138株機能未知遺伝子456個について、エフェクター分子の探索を試みた。このシステムにおいてエフェクターとして既に報告されているサルモネラエフェクター分子SopE2、エルシニアエフェクター分子YopEが酵母に対して増殖抑制を示し、このシステムが病原菌の種を超えたエフェクター分子の網羅的スクリーニングシステムとして機能することを確認している。そこで、C.pneumoniae機能未知遺伝子について解析を行ったところ、62個の増殖抑制を示すエフェクター候補分子を見いだすことに成功した(Biosci Biotechnol Biochem. 73 : 2261-2267, 2009)。またカルボキシペプチダーゼY-インベルターゼ融合蛋白質を用いた小胞輸送系の異常を検出するスクリーニングシステムも開発しており、現在このシステムを用いて小胞輸送に影響するエフェクター分子の同定を行っている。これらのスクリーニングシステムは分子遺伝学的手法が乏しく現在まで病原因子の特定がほとんどなされていないC.pneumoniaeの感染戦略を明らかにするうえで、その突破口なることが期待される。本研究により開発したシステムは多数の病原菌において活用できる汎用性を備えたシステムであり、今後さらに様々な病原菌へ適用することで、その感染戦略を明らかし、エフェクター分子を標的とした新たな分子標的薬剤の開発に繋がることが見込まれる。

Report

(3 results)
  • 2009 Annual Research Report
  • 2008 Annual Research Report
  • 2007 Annual Research Report
  • Research Products

    (20 results)

All 2010 2009 2008 2007

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (15 results) Book (2 results)

  • [Journal Article] Development of a novel functional high-throughput screening system for pathogen effectors in the yeast Saccharomvices cerevisiae2009

    • Author(s)
      田淵光昭
    • Journal Title

      Biosci Biotechnol Biochem. 73

      Pages: 2261-2267

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    • Author(s)
      Kawai Y, Miyashita N, Kishi F, Tabuchi M, Oda K, Yamacguhi T, Kawasaki K, Yamazaki T, Ouchi K
    • Journal Title

      European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases (In press)

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      Onouchi Y, Gunji T, Burns JC, Shimizu C, Newburger JW, Yashiro M, Nakamura Y, Yanagawa H, Wakui K, Fukushima Y, Kishi F, Hamamoto K, Terai M, Sato Y, Ouchi K, Saji T, Nariai A, Kaburagi Y, Yoshikawa T, Suzuki K, Tanaka T, Nagai T, Cho H, Fujino A, Sekine A, Nakamichi R, Tsunoda T, Kawasaki T, Nakamura Y, Hata A.
    • Journal Title

      Nature Genetics 40

      Pages: 35-42

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      河合泰宏
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      第83回日本細菌学会総会
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      パシフィコ横浜(神奈川県)
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      2010-03-27
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      パシフィコ横浜(神奈川県)
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      神戸ポートアイランド(兵庫県)
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      神戸
    • Year and Date
      2008-12-12
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      松江
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      2008-10-16
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      田淵光昭, 簗取いずみ, 岸文雄
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      第32回日本鉄バイオサイエンス学会学術集会
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      2008-09-14
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      京都
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      2008-08-29
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      田淵光昭, 簗取いずみ, 岸文雄
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      第60回日本細胞生物学会大会
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      横浜
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      2008-07-01
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  • [Presentation] レトロマーによる鉄輸送体のリサイクリングエンドソームヘの輸送調節2008

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      田淵光昭, 簗取いずみ, 岸文雄
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      第49回日本生化学会中国・四国支部例会
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      高松
    • Year and Date
      2008-05-16
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  • [Presentation] 鉄輸送体DMT1のリサイクリングエンドソーム標的化シグナル配列の解析2007

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      田淵 光昭、簗取 いずみ、三棹 聡美、岸 文雄
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      第30回日本分子生物学会・第80回日本生化学会大会合同大会
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      横浜
    • Year and Date
      2007-12-13
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  • [Presentation] Analysis of the structural requirements for recycling endosome-targeting of DMT1 isoform II2007

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      M. Tabuchi, I. Yanatori, F. Kishi
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    • Place of Presentation
      京都
    • Year and Date
      2007-04-06
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      M. Nishie, S. Takumi, H. Miyanohara, J. Nishi, K. Yoshiie, H. Oda, M. Komatsu, K. Aoyama, M. Horiuchi, F. Kishi, M. Takeuchi, T. Takeuchi
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      第一回アジア環境変異原学会・日本環境変異原学会第36回大会
    • Place of Presentation
      北九州
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      西江 真希子、内匠 正太、宮之原 弘晃、西 順一郎、吉家 清貴、小田 紘、小松 正治、青山 公治、堀内 正久、岸 文雄、竹内 実、竹内 亨
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      第78回日本衛生学会総会
    • Place of Presentation
      熊本
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  • [Book] 医科細菌学 改訂第4版2010

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      笹川千尋・林哲也
    • Total Pages
      430
    • Publisher
      南江堂
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  • [Book] 小児の市中感染症診療パーフェクトガイド2009

    • Author(s)
      武内一
    • Total Pages
      231
    • Publisher
      文光堂
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Published: 2007-04-01   Modified: 2016-04-21  

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