Study of the recognition of LPS by TLR4-MD-2 complex and the mechanism of TLR4 dimerization

• Project/Area Number: 19770135
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Biophysics
• Research Institution: Suntory Institute for Bioorganic Research
• Principal Investigator: YAMAJI Nahoko サントリー生物研, 研究員 (00353516)
• Project Period (FY): 2007 – 2008
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2009)
• Budget Amount: ¥3,860,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥660,000); Fiscal Year 2009: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000); Fiscal Year 2008: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000); Fiscal Year 2007: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
• Keywords: 生体膜 / 受容体 / チャンネル / 免疫学 / 生物物理 / 蛋白質 / 分子認識

Research Abstract

MD-2-lipidA複合体の構造解析を行うため、MD-2の大腸菌発現系の構築を行った。結果、MD-2は不溶性画分に得られたため、変性剤存在下での精製、リフォールディングを試みたが変性剤の除去によりMD-2は沈殿し、精製は困難であった。そこで、コールドショック発現誘導とシャペロンとの共発現により、MD-2を可溶化した状態で発現することに成功した。