トキソプラズマ潜伏により誘導される抗ウイルス応答：原虫とウイルスの攻防を紐解く
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19K22354
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
Medium-sized Section 42:Veterinary medical science, animal science, and related fields
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| Research Institution | Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine |
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Principal Investigator |
玄 学南 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 教授 (10292096)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
正谷 達謄 鹿児島大学, 農水産獣医学域獣医学系, 准教授 (70614072)
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| Project Period (FY) |
2019-06-28 – 2022-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2019)
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| Budget Amount *help |
¥6,370,000 (Direct Cost: ¥4,900,000、Indirect Cost: ¥1,470,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000)
Fiscal Year 2019: ¥2,470,000 (Direct Cost: ¥1,900,000、Indirect Cost: ¥570,000)
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| Keywords | トキソプラズマ / タキゾイト / ブラディゾイト / ステージ変換 / 抗ウイルス / 自然免疫 / 原虫 / ウイルス / 共感染 |
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| Outline of Research at the Start |
研究代表者らが独自に見出した新規かつユニークな現象である「トキソプラズマ潜伏感染宿主における抗ウイルス自然免疫応答の亢進」について、そのメカニズム及び意義の一端を明らかにする。本課題を切り口とし、「1つの宿主をめぐる、複数種類の病原体どうしの攻防」という新たな研究分野の開拓を目指す。
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、培養細胞や実験動物を用いた原虫-ウイルス共感染実験によって、トキソプラズマ潜伏感染がウイルスの増殖や 病原性に及ぼす影響を明らかにする。当該年度に得られた成果は下記の通りである。１）自然免疫に関与する宿主転写因子に注目して研究を行った。間接蛍光抗体法によりトキソプラズマ潜伏感染ヒト線維芽細胞におけるSTAT1の局在ならびにリン酸化を評価した結果、高pHによるブラディゾイトへの誘導を行った感染細胞ではSTAT1の核内移行が認められた。一方、通常のpHのまま培養することでタキゾイトのままにした場合、感染細胞ではSTAT1の核内移行が認められなかった。したがって、トキソプラズマのブラディゾイトステージ虫体は感染細胞のSTAT1を活性化することで抗ウイルス自然免疫応答を活性化させている可能性が考えられた。２）次に、トキソプラズマ潜伏感染が誘導する抗ウイルス自然免疫応答にSTAT1が担う役割を調べる目的で、CRISPR/Cas9に基づくゲノム編集によりSTAT1欠損細胞の作出を試みた。Cas9蛋白質およびガイドRNAを同時に発現できるpX330ベクターに、ピューロマイシン耐性遺伝子及びヒトSTAT1をターゲットとしたガイドRNA配列を組み込み、ヒト由来293T細胞に導入した。ピューロマイシンによるセレクションののち、クローニングし、ウェスタンブロットによってSTAT1が欠損していることを確認した。この細胞にトキソプラズマを潜伏感染させようと試みたが、高pHの条件では細胞が死滅してしまった。そのため現在、構築したプラスミドをヒト線維芽細胞に導入し、欠損細胞を作製している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の計画通りに進展し、所期の成果が得られたため。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後、STAT1欠損株における虫体ステージ変換の条件検討を詳細に行う。
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Report
(1 results)
Research Products
(2 results)
