内因性TCRおよびMHC発現を抑制した非自己T細胞によるT細胞輸注療法の開発
| Project/Area Number |
19K23919
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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0901:Oncology and related fields
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
岡田 怜美 長崎大学, 病院(医学系), 助教 (40849501)
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| Project Period (FY) |
2019-08-30 – 2022-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2020)
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| Budget Amount *help |
¥2,860,000 (Direct Cost: ¥2,200,000、Indirect Cost: ¥660,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2019: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
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| Keywords | 輸注療法 / 宿主組織傷害 / 拒絶 / 腫瘍免疫 / TCR |
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| Outline of Research at the Start |
免疫療法は悪性腫瘍に対する新たな治療として注目されている。免疫療法のひとつである受容体改変T細胞療法による悪性腫瘍の克服は、近年大きく期待されている分野である。現在の受容体改変T細胞療法は自己T細胞を用いたものであり、汎用性を阻んでいる。そこで本研究では、より効果的で汎用性の高いT細胞療法の開発を目指すため、非自己T細胞を用いた受容体改変T細胞療法に着目した。非自己T細胞を用いる際に“宿主組織傷害”と“輸注細胞の拒絶”が克服すべき課題であり、本研究では、内因性TCR発現の抑制とMHC発現の抑制を行うことで非自己T細胞による輸注療法の可能性を明らかにする。
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は、非自己T細胞を用いたT細胞療法の確立であり“宿主組織傷害”と“輸注細胞の拒絶”を抑制した細胞の開発である。すなわち、輸注細胞である非自己T細胞の内因性TCRの発現を抑制することで宿主組織傷害を抑制し、さらに輸注細胞のMHC発現を抑制することで拒絶を抑制することを目的とする。
本研究ではがん精巣抗原であるNY-ESO-1抗原をターゲットとし、ヒトリンパ球にNY-ESO-1特異的TCRを遺伝子導入した。内因性TCRの発現を抑制するsiRNAを搭載させたレトロウイルスベクターを用いることで、同時に内因性TCRの発現を抑制させることが可能であった。また、MHC classⅠ分子の発現の抑制はβ2ミクログロブリンをターゲットとし、レンチウイルスベクターを用いたCRISPR/Cas9システムにより行った。
これら2種類のウイルスベクターを導入することで、内因性TCRおよびMHC発現をともに抑制し、かつNY-ESO-1特異的TCRを発現したリンパ球を作製することができた。2種類のウイルスベクターを共に導入できた細胞の割合は低く、ビーズ分離法によるセレクションを行うことで、高純度の遺伝子導入細胞を作製した。
この遺伝子導入細胞をin vitroで評価し、アロ抗原に対する反応性の低下、さらに抗原性の低下を認めた。またサイトカイン産生にて抗腫瘍効果を評価し、遺伝子導入細胞での効果的な抗腫瘍効果を示した。
この遺伝子導入細胞の抗腫瘍効果をマウスモデルを用いて検討した。免疫不全マウスにNY-ESO-1発現ヒト癌細胞株であるNW-MEL-38を皮下投与し、同時に遺伝子導入細胞を輸注した。輸注後、腫瘍体積を測定すると遺伝子導入細胞を輸注したマウスでは腫瘍増大を抑制することができた。
今後は同様のマウスモデルを用いて、遺伝子導入細胞による宿主組織傷害の評価、さらに拒絶反応の評価を行う予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
内因性TCRを抑制し、かつMHC classⅠ分子発現を抑制したT細胞を作製することができ、in vivoでの評価にて抗腫瘍効果の証明は可能であった。マウスモデルでの宿主組織傷害、拒絶の評価が難しく、更なる検討が必要である。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は内因性TCRかつMHC classⅠ分子の発現を抑制したT細胞をより効率よく作製する条件を検討する。さらにこの遺伝子導入細胞を免疫不全マウスモデルに輸注し、抗腫瘍効果に加えて、宿主組織傷害、拒絶反応を評価する予定である。
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Report
(2 results)
Research Products
(1 results)
