| Project/Area Number |
19K24090
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
0907:Oral science and related fields
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
平井 麻絵 大阪大学, 歯学部附属病院, 医員 (30846530)
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| Project Period (FY) |
2019-08-30 – 2021-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2019)
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| Budget Amount *help |
¥2,860,000 (Direct Cost: ¥2,200,000、Indirect Cost: ¥660,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2019: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
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| Keywords | 歯根膜 / PLAP-1 / 破骨細胞 / 歯周病 |
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| Outline of Research at the Start |
私は、歯周病における歯根膜の炎症反応を解析する過程で、歯根膜に特徴的に発現する細胞外基質タンパクであるPLAP-1の発現が同部の炎症反応により有意に低下することを、in vivo、in vitroの解析から見出した。そこで本研究課題では、炎症反応によるPLAP-1発現低下の分子機序についてmicro RNAの関与に着目し解析する。また、PLAP-1が破骨細胞の形成過程に及ぼす影響についてin vitroにて解析するとともに、PLAP-1ノックアウトマウスを用いたin vivo解析により、PLAP-1の発現低下が歯周病の進行による歯槽骨破壊に及ぼす影響について解析する。
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、炎症歯根膜におけるPLAP-1の発現低下の分子機序について検討するとともに、PLAP-1が破骨細胞の形成過程に及ぼす影響を明らかにすることにより、炎症歯根膜におけるPLAP-1の発現低下が歯槽骨の吸収に及ぼす影響を明らかにすることを目的に研究を実施している。
令和元年度にはヒト歯根膜細胞(HPDL)における炎症性サイトカインによるPLAP-1発現抑制の分子機序に関する解析を行った。まずmicro RNAの役割に着目し検討した結果、HPDLをIL-1βで刺激した際にmicro RNA21、101の発現が上昇することがreal-time PCR法にて明らかとなったことから、炎症時にmicro RNA21、micro RNA101が歯根膜細胞に発現していることが示唆された。そこで同分子のmimicとinhibitorをHPDLに導入した際のPLAP-1の遺伝子発現に及ぼす影響についてreal-time PCR法にて解析した結果、いずれのmicro RNAもIL-1βによるPLAP-1の発現低下への関与は認められなかった。
次にPLAP-1が破骨細胞の形成過程に及ぼす影響について検討するために、マウス骨髄細胞をM-CSF存在下にて破骨前駆細胞へ分化誘導する際に、マウスリコンビナントPLAP-1を添加し、PLAP-1が単球から破骨前駆細胞への分化過程に及ぼす影響について解析した。F4/80、CD11bの発現をフローサイトメトリー法にて検討した結果、PLAP-1の添加は破骨前駆細胞への分化に影響しなかった。またRANK遺伝子(Tnfrs11a)の発現をReal-time PCR法にて検討した結果、RANKの発現に差は認めなかったことから、PLAP-1はM-CSF誘導性の破骨前駆細胞への分化に影響を及ぼさないことが示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
令和元年度には、PLAP-1はM-CSF誘導性の破骨前駆細胞への分化に影響を及ぼさないことが示唆できたことから、PLAP-1が破骨細胞の形成過程に及ぼす影響の一部について解明できた。予定されていた実験はほぼ予定道りに遂行できたことから、研究はおおむね順調に進展していると考える。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後の研究では、引き続きPLAP-1が破骨細胞の形成過程に及ぼす影響について検討するために、PLAP-1がRANKL誘導性の破骨細胞分化に及ぼす影響を、各種マーカー遺伝子の発現をReal-time PCR法にて解析することに加え、TRAP染色にて成熟破骨細胞形成を評価する。PLAP-1が破骨細胞の形成に及ぼす影響が明らかとなれば、その分子機序について継続して検討する予定である。
一方、PLAP-1ノックアウトマウスおよび野生型マウスに絹糸結紮歯周病モデルを実施し、microCTにて骨吸収を評価するとともに、組織学的解析により歯槽骨吸収面における破骨細胞の形成を検討し、PLAP-1の発現低下が歯周病の進行による歯槽骨破壊に及ぼす影響に関する解析を行うことを予定している。
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Report
(1 results)
Research Products
(1 results)
