導出リンパ管・集合リンパ管の作製とリンパ管形成に関わる因子の同定
| Project/Area Number |
19K24252
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
0908:Society medicine, nursing, and related fields
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
中島 由加里 金沢大学, 保健学系, 助教 (40846680)
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| Project Period (FY) |
2019-08-30 – 2021-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2019)
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| Budget Amount *help |
¥2,860,000 (Direct Cost: ¥2,200,000、Indirect Cost: ¥660,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2019: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
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| Keywords | 培養リンパ管 / リンパ浮腫 / 脂肪組織由来間葉系幹細胞 / 再生医療 / リンパ管 |
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| Outline of Research at the Start |
リンパ浮腫には根治治療がなく、これを目指すためにはリンパ節郭清部のリンパ管再建が必要となる。よって、本研究ではリンパ管内皮細胞への分化能をもつ脂肪組織由来間葉系幹細胞からリンパ輸送能をもつ導出リンパ管、あるいは集合リンパ管を作製し、このリンパ管形成に関わる因子を同定する。これにより、平滑筋細胞を伴うリンパ管形成の分子機構を解明する。同定した因子や分子機構は、再生医療を用いたリンパ浮腫患者の根治治療やリンパ浮腫発症予防に役立ち、世界に先駆けるリンパ浮腫治療・予防法の開発に繋がることが期待される。
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度は、3次元培養にて導出リンパ管作製を目指した。具体的にはまず、脂肪組織由来間葉系幹細胞を用いて、三次元培養にて毛細リンパ管作製を行った。3次元培養の手法として、細胞表面にフィブロネクチンとゼラチンをコーティングし、細胞を積層させるLayer-by-Layer（LbL、細胞積層法）を用いた。しかしながら、LbL後、3日間サンプルをインキュベーションすると、細胞はほとんど死んでしまい、多層構造とならず、組織学的な評価も困難であった。
これを解決するために、LbLのプロトコルの見直しと改良を行った。具体的には、細胞比率、使用細胞種、コーティング、使用培地について、条件検討を行った。その結果、播種した細胞のほとんどが生着し、多層構造をもつ立体組織を構築できた。脂肪組織由来間葉系幹細胞が多すぎる場合、細胞同士が接着せず、浮遊して細胞死に繋がってしまうことが考えられた。
細胞死に対する問題はクリアできたため、現在は、より管腔形成を促進する条件の検討を行っている。作製した組織は、リンパ管内皮細胞マーカーであるLYVE-1のホールマウント染色と免疫染色を行い、管腔形成の評価を実施している。
これと同時に、導出リンパ管作製の条件検討も実施している。導出リンパ管作製のためには、培養毛細リンパ管の管腔周囲を1～2層程度の平滑筋細胞が取り囲む必要がある。平滑筋細胞、脂肪組織由来間葉系幹細胞の共培養を行うため、使用培地、細胞比率、培養期間について条件検討を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
3次元培養において、細胞死が多い原因が特定でき、解決方法を見つけられたため、次のステップへと進むことができている。
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| Strategy for Future Research Activity |
基本的に、当初の計画通りに進める。導出リンパ管を作製し、その後培養上清の網羅的解析を行い、リンパ管形成に関わる因子を同定する。
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Report
(1 results)
Research Products
(9 results)
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[Journal Article] Factors affecting superficial vein visibility at the upper limb in healthy young adults: A cross-sectional observational study2020
Author(s)
Mukai K, Fujii T, Nakajima Y, Ishida A, Kato M, Takahashi M, Tsuda M, Hashiba N, Mori N, Yamanaka A, Nakatani T
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Journal Title
The Journal of Vascular Access
Volume: in press
Pages: 1-8
DOI
Related Report
Peer Reviewed / Open Access
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