Development of phosphate-affinity two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis

• Project/Area Number: 20790036
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Physical pharmacy
• Research Institution: Hiroshima University
• Principal Investigator: KINOSHITA Emiko Hiroshima University, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (40379912)
• Project Period (FY): 2008 – 2009
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2009)
• Budget Amount: ¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000); Fiscal Year 2009: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000); Fiscal Year 2008: ¥2,600,000 (Direct Cost: ¥2,000,000、Indirect Cost: ¥600,000)
• Keywords: ナノ材料 / 分子認識 / 蛋白質 / バイオテクノロジー / 分析化学 / リン酸化 / フォスタグ / 電気泳動

Research Abstract

The researcher developed a novel type of two-dimensional electrophoresis using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) for the analysis of phosphoproteins. By this procedure, the separations of phosphoprotein isotypes should be improved relative to those by current PAGE methods.

Research Products

• [Journal Article] Genotyping and mapping assay of single-nucleotide polymorphisms in CYP3A5 using DNA-binding zinc(II) complexes (2010)
  • Author(s): K inoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Nakashima, H., Koike, T
  • Journal Title: Clin. Biochem 43 Pages: 302-306
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Genotyping and mapping assay of single-nucleotide polymorphisms in CYP3A5 using DNA-binding zinc(II) complexes (2010)
  • Author(s): Kinoshita, E.
  • Journal Title: Clin.Biochem 43 Pages: 302-306
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Separation and detection of large phosphoproteins using Phos-tag SDS-PAGE (2009)
  • Author(s): K inoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Koike, T
  • Journal Title: Nat. Protoc 4 Pages: 1513-1521
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Mobility shift detection of phosphorylation on large proteins using a Phos-tag SDS-PAGE gel strengthened with agarose (2009)
  • Author(s): K inoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Ujihara, H., Koike, T
  • Journal Title: Proteomics 9 Pages: 4098-4101
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Phosphate-affinity gel electrophoresis using a Phos-tag molecule for phosphoproteome study (2009)
  • Author(s): K inoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Koike, T
  • Journal Title: Curr. Proteomics 6 Pages: 104-121
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Phos-tag beads as an immunoblotting enhancer for selective detection of phosphoproteins in cell lysates (2009)
  • Author(s): Emiko Kinoshita-Kikuta, Kinoshita, E., Koike, T
  • Journal Title: Anal. Biochem 389 Pages: 83-85
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A Phos-tag-based fluorescence resonance energy transfer system for the analysis of the dephosphorylation of phosphopeptides (2009)
  • Author(s): T akiyama, K., Kinoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Fujioka, Y., Kubo, Y., Koike, T
  • Journal Title: Anal. Biochem 388 Pages: 235-241
  • NAID: 120002023643
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Two-dimensional phosphate-affinity gel electrophoresis for the analysis of phosphoprotein isotypes (2009)
  • Author(s): K inoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Matsubara, M., Aoki, Y., Ohie, S., Mouri, Y., Koike, T
  • Journal Title: Electrophoresis 30 Pages: 550-559
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Phos-tag beads as an immunoblotting enhancer for selective detection of phosphoproteins in cell lysates. (2009)
  • Author(s): Kinoshita-Kikuta, E.
  • Journal Title: Anal.Biochem. 389 Pages: 83-85
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Mobility shift detection of phosphorylation on large proteins using a Phos-tag SDS-PAGE gel strengthened with agarose. (2009)
  • Author(s): Kinoshita, E.
  • Journal Title: Proteomics 9 Pages: 4098-4101
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Separation and detection of large phosphoproteins using Phos-tag SDS-PAGE. (2009)
  • Author(s): Kinoshita, E.
  • Journal Title: Nat.Protoc. 4 Pages: 1513-1521
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Two-dimensional phosphate-affinity gel electrophoresis for the analysis of phosphoprotein isotypes (2009)
  • Author(s): Kinoshita, Eiji
  • Journal Title: Electrophoresis 30 Pages: 550-559
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A Phos-tag-based fluorescence resonance energy transfer system for the analysis of the dephosphorylation of phosphopeptides (2009)
  • Author(s): Takiyama, Kei
  • Journal Title: Anal. Biochem. (In press)
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] FANCI phosphorylation functions as a molecular switch to turn on the Fanconi anemia pathway (2008)
  • Author(s): I shiai, M., Kitao, H., Smogorzewska, A., Tomida, J., Kinomura, A., Uchida, E., Saberi, A., Kinoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Koike, T., Tashiro, S., Elledge, S.J., Takata, M
  • Journal Title: Nat. Struct. Mol. Biol 15 Pages: 1138-1146
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Detection of the Gua/Cyt-to-Cyt/Gua mutation in a Gua/Cyt-lined sequence using Zn^<2+>-cyclen polyacrylamide gel electrophoresis (2008)
  • Author(s): K inoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Yoshimoto, M., Koike, T
  • Journal Title: Anal. Biochem 380 Pages: 122-127
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Separation of phosphoprotein isotypes having the same number of phosphate groups using phosphate-affinity SDS-PAGE (2008)
  • Author(s): K inoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Matsubara, M., Yamada, S., Nakamura, H., Shiro, Y., Aoki, Y., Okita, K., Koike, T
  • Journal Title: Proteomics 8 Pages: 2994-3003
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A mobility shift detection method for DNA methylation analysis using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis (2008)
  • Author(s): Emiko Kinoshita-Kikuta, Kinoshita, E., Koike, T
  • Journal Title: Anal. Biochem 378 Pages: 102-104
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A mobility shift detection method for DNA methylation analysis using phosphate-affinity polyacrylamide gelelectrophoresis (2008)
  • Author(s): Kinoshita-Kikuta, Emiko
  • Journal Title: Anal. Biochem. 378 Pages: 102-104
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Separation of phosphoprotein isotypes having the same number of phosphate groups using phosphate-affinity SDS-PAGE (2008)
  • Author(s): Kinoshita, Eiji
  • Journal Title: Proteomics 8 Pages: 2994-3003
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Detection of the Gua/Cyt-to-Cyt/Gua mutation in a Gua/Cyt-lined sequence using Zn^<2 +>-cyclen polyacrylamide gelelectrophoresis (2008)
  • Author(s): Kinoshita, Eiji
  • Journal Title: Anal. Biochem. 380 Pages: 122-127
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] FANCI phosphorylation functions as a molecular switch to torn on the Fanconi anemia pathway (2008)
  • Author(s): Ishiai, Masamichi
  • Journal Title: Nat. Struct. Mol. Biol. 15 Pages: 1138-1146
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 細胞内リン酸化シグナル解析におけるPhos-tag固定化ポリマーの新しい応用法 (2010)
  • Author(s): 木下恵美子, 木下英司, 山田篤志, 氏原弘洋, 小池透
  • Organizer: 日本薬学会第130年会
  • Place of Presentation: 岡山県桃太郎アリーナ
  • Year and Date: 2010-03-29
• [Presentation] DNA結合性亜鉛錯体を用いたCYP3A5遺伝子における一塩基多型の高精度検出法 (2010)
  • Author(s): 木下英司, 木下恵美子, 中島弘美, 小池透
  • Organizer: 日本薬学会第130年会
  • Place of Presentation: 岡山県桃太郎アリーナ
  • Year and Date: 2010-03-29
• [Presentation] 新規リン酸親和性カラムを用いたヌクレオチド類の精製法 (2010)
  • Author(s): 宗村雅男, 木下英司, 木下恵美子, 山田篤志, 小池透
  • Organizer: 日本薬学会第130年会
  • Place of Presentation: 岡山県桃太郎アリーナ
  • Year and Date: 2010-03-29
• [Presentation] 細胞内リン酸化シグナル解析におけるPhos-tag固定化ポリマーの新しい応用法 (2010)
  • Author(s): 木下恵美子
  • Organizer: 日本薬学会第130年会
  • Place of Presentation: 神戸国際展示場(岡山市)
  • Year and Date: 2010-03-29
• [Presentation] 改良型リン酸基親和性電気泳動法による200 kDa以上の高分子量タンパク質のリン酸化異性体解析 (2009)
  • Author(s): 木下恵美子, 木下英司, 山田篤志, 氏原弘洋, 小池透
  • Organizer: 第82回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 神戸国際展示場
  • Year and Date: 2009-10-24
• [Presentation] リン酸基親和性電気泳動法を用いたヒスチジン・アスパラギンリン酸化タンパク質の定量解析法 (2009)
  • Author(s): 柳原志穂, 木下恵美子, 木下英司, 中神明, 小池透
  • Organizer: 第82回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 神戸国際展示場
  • Year and Date: 2009-10-24
• [Presentation] 細胞内リン酸化タンパク質を高精度に検出するためのPhos-tagビーズによるサンプル前処理法 (2009)
  • Author(s): 山田篤志, 木下恵美子, 木下英司, 小池透
  • Organizer: 第82回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 神戸国際展示場
  • Year and Date: 2009-10-24
• [Presentation] 改良型リン酸基親和性電気泳動法による200kDa以上の高分子量タンパク質のリン酸化異性体解析 (2009)
  • Author(s): 木下恵美子
  • Organizer: 第82回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 神戸国際展示場(神戸市)
  • Year and Date: 2009-10-24
• [Presentation] 蛋白質リン酸化解析のためのリン酸基親和性2次元電気泳動法 (2009)
  • Author(s): 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • Organizer: 第60回日本電気泳動学会総会
  • Place of Presentation: 松本市Mウィング文化センター
  • Year and Date: 2009-09-19
• [Presentation] Phos-tag固定化ポリマーを利用したシグナル伝達解析における選択的な蛋白質リン酸化検出のための新技術 (2009)
  • Author(s): 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • Organizer: 日本ヒトプロテオーム機構第7回大会
  • Place of Presentation: 北里大学薬学部
  • Year and Date: 2009-07-28
• [Presentation] フォスタグ電気泳動法を用いた細菌2成分情報伝達系におけるリン酸化ヒスチジンおよびリン酸化アスパラギン酸蛋白質異性体の同時定量解析 (2009)
  • Author(s): 木下英司, 木下恵美子, 中村寛夫, 城宜嗣, 小池透
  • Organizer: 第9回蛋白質科学会
  • Place of Presentation: 熊本全日空ホテルニュースカイ
  • Year and Date: 2009-05-20
• [Presentation] リン酸基アフィニティービーズ"Phos-tag Toyopearl"を用いたリン酸化プロテオーム解析における前処理技術の開発 (2009)
  • Author(s): 山田篤志, 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • Organizer: 第9回蛋白質科学会
  • Place of Presentation: 熊本全日空ホテルニュースカイ
  • Year and Date: 2009-05-20
• [Presentation] Phos-tagを利用したメチル化DNA検出法の開発 (2009)
  • Author(s): 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • Organizer: 第50回日本生化学会中国・四国支部例会
  • Place of Presentation: 鳥取市とりぎん文化会館
  • Year and Date: 2009-05-16
• [Presentation] リン酸基結合ナノ分子を利用した高感度・高効率なエピジェネティクス変異検出技法の創成 (2009)
  • Author(s): 木下英司, 木下恵美子, 中島弘美, 氏原弘洋, 小池透
  • Organizer: 日本薬学会第129年会
  • Place of Presentation: 国立京都国際会館
  • Year and Date: 2009-03-26
• [Presentation] 改変亜鉛サイクレン電気泳動法を用いたAT含有率が高い短PCR断片のSNP解析 (2009)
  • Author(s): 原田奈生子, 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • Organizer: 日本薬学会第129年会
  • Place of Presentation: 国立京都国際会館
  • Year and Date: 2009-03-26
• [Presentation] ペプチドのリン酸化状態を検出する蛍光共鳴エネルギー移動システムの開発 (2009)
  • Author(s): 石村憲和, 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • Organizer: 日本薬学会第129年会
  • Place of Presentation: 国立京都国際会館
  • Year and Date: 2009-03-26
• [Presentation] リン酸基親和性電気泳動法を利用した同じリン酸化量を有するリン酸化蛋白質異性体の分離検出 (2008)
  • Author(s): 木下英司, 木下恵美子, 松原守, 山田斉爾, 中村寛夫, 城宜嗣, 青木悠里, 沖田鋼季, 小池透
  • Organizer: BMB2008
  • Place of Presentation: 神戸国際展示場
  • Year and Date: 2008-12-12
• [Presentation] リン酸基アフィニティービーズ"Phos-tagTM Toyopearl"を用いたリン酸化ペプチド&タンパク質の分離濃縮 (2008)
  • Author(s): 山田篤志, 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • Organizer: BMB2008
  • Place of Presentation: 神戸国際展示場
  • Year and Date: 2008-12-12
• [Presentation] ペプチドのリン酸化状態を検出する蛍光共鳴エネルギー移動システムの開発 (2008)
  • Author(s): 多幾山敬, 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • Organizer: BMB2008
  • Place of Presentation: 神戸国際展示場
  • Year and Date: 2008-12-12
• [Presentation] Separation of phosphoprotein isotypes with the same phosphate stoichiometry using phosphate-affinity SDS-PAGE (2008)
  • Author(s): 木下英司
  • Organizer: BMB2008
  • Place of Presentation: 神戸国際展示場
  • Year and Date: 2008-12-12
• [Presentation] リン酸基親和性電気泳動法を利用した新しい遺伝子診断技術 (2008)
  • Author(s): 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • Organizer: 第59回日本電気泳動学会総会
  • Place of Presentation: 麻布大学百周年記念ホール
  • Year and Date: 2008-11-16
• [Presentation] フォスタグ結合型新規リン酸基アフィニティービーズを利用した細胞抽出液からのリン酸化蛋白質の分離と濃縮 (2008)
  • Author(s): 木下英司, 木下恵美子, 山田篤志, 井上知香, 小池透
  • Organizer: 日本ヒトプロテオーム機構第6回大会
  • Place of Presentation: ホテル阪急エキスポパーク
  • Year and Date: 2008-07-29
• [Presentation] ペプチドのリン酸化/脱リン酸化反応を検出するfret型蛍光センサーの開発 (2008)
  • Author(s): 多幾山敬, 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • Organizer: 第49回日本生化学会中国・四国支部例会
  • Place of Presentation: 香川県県民ホール
  • Year and Date: 2008-05-16
• [Book] 細胞内リン酸化タンパク質を高精度に検出するためのPhos-tagビーズによるサンプル前処理法 (2009)
  • Author(s): 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • Publisher: 秀潤社
• [Book] Methods in Molecular Biology, 578 (ed. by Komar AA) (2009)
  • Author(s): Emiko Kinoshita-Kikuta, Kinoshita, E., Koike, T
  • Publisher: Humana Press
• [Book] Methods in Molecular Biology, 578 (ed. by Komar AA) (2009)
  • Author(s): K inoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Koike, T
  • Publisher: Humana Press
• [Book] Phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis for SNP genotyping. in Single Nucleotide Polymorphisms (2009)
  • Author(s): Kinoshita, E.
  • Total Pages: 10
  • Publisher: Humana Press
• [Book] Zn(II)-cyclen polyacrylamide gel electrophoresis for SNP detection. in Single Nucleotide Polymorphisms, Methods in Molecular Biology, 578 (ed.by Komar AA) (2009)
  • Author(s): Kinoshita-Kikuta, E.
  • Total Pages: 14
  • Publisher: Humana Press
• [Book] 細胞内リン酸化タンパク質を高精度に検出するためのPhos-tagビーズによるサンプル前処理法.細胞工学 (2009)
  • Author(s): 木下英司
  • Total Pages: 5
  • Publisher: 秀潤社
• [Remarks]
  • URL: http://home.hiroshima-u.ac.jp/tkoike/index.html
• [Remarks]
  • URL: http://home.hiroshima-u.ac.jp/tkoike/index.html