再生医療・細胞治療における安全性向上を目指した腫瘍形成制御法の開発研究
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20K07095
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 47040:Pharmacology-related
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| Research Institution | The University of Tokushima (2021-2022)
Institute of Physical and Chemical Research (2020) |
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Principal Investigator |
田原 強 徳島大学, 先端研究推進センター, 准教授 (20419708)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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| Budget Amount *help |
¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
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| Keywords | 再生医療 / イメージング |
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| Outline of Research at the Start |
癌化した際に働く遺伝子プロモーター制御化でHSV-TKが発現するベクターを構築後、安定型導入ES細胞を樹立し、分化、移植を行う。HSV-TKは、移植細胞が分化細胞として機能している間は発現しないが、癌化した場合、プロモーターが活性化され、発現する。この細胞は抗ウイルス薬で死を誘発することが可能である。さらにHSV-TKに対するPET用プローブがあるため生体内での観察が可能である。以上のことから、本研究の進行により、移植細胞の癌化の状態を非侵襲的に経過観察でき、さらに抗ウイルス薬を用いて癌化細胞を死滅させることで、安全かつ高精細な移植治療に繋がる研究である。
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| Outline of Annual Research Achievements |
昨年度、未分化特異的遺伝子であるNanog遺伝子に着目し、その上流領域をクローニングすることにより、より確実にがん特異的（未分化）に機能するHSV-TKタンパク質発現ベクターの構築を目指した。現在、およそ1000bp程度のNanog遺伝子プロモーター領域のクローニングに成功し、クローニングしたNanog遺伝子プロモーター領域に未分化細胞特異的に機能する領域が含まれているかを確認するため、ルシフェラーゼアッセイの準備を進めていた。プラスミド構築後、培養細胞を用いて、がん細胞において、特異的に機能するかどうかを検討したところ、ルシフェラーゼ活性が観察されたことから、Nanog遺伝子プロモーターが機能することが確認できた。そのため、次に本来の目的であるHSV-sr39tk遺伝子をNanog遺伝子プロモーター領域下につなぎ、がん細胞もしくは未分化細胞特異的にHSV-sr39tkタンパク質が発現するベクターの構築を行い、成功した。実際にがん細胞においてHSV-sr39tkタンパク質が発現しているかどうか調べたところ、予想通りタンパク質が細胞内において発現していることが確かめられた。
Oct3/4遺伝子プロモーターに続き、Nanog遺伝子プロモーターのクローニングおよび機能の確認が行えたことから、どちらがより特異的にがん細胞もしくは未分化細胞において機能するプロモーターであるかの解析を現在行っている。より特異的なプロモーターを最終的に使用したいと考えている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
徳島大学への所属移動およびコロナ感染症対策により、また、未分化細胞特異的なプロモーター領域のクローニングに予定以上に時間を要してしまったため、当初計画より進捗が遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
本研究課題の目的である未分化細胞特異的なプロモーター領域のクローニングが実質完了したため、今後は、細胞実験を主とし、未分化細胞特異的プロモーターにより発現するHSV-TK遺伝子を導入した細胞を樹立し、腫瘍形成を制御できるかどうかを調べていく。また、動物への移植を行い、動物レベルでの検討も予定している。
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Report
(3 results)
Research Products
(1 results)
