多光子励起顕微鏡と量子ドットを用いたANCA関連血管炎の腎臟イメージング解析

• Project/Area Number: 21790377
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Experimental pathology
• Research Institution: Chiba University
• Principal Investigator: 長尾 朋和 Chiba University, 医学(系)研究科(研究院), その他 (90451757)
• Project Period (FY): 2009 – 2011
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2011)
• Budget Amount: ¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000); Fiscal Year 2011: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000); Fiscal Year 2010: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000); Fiscal Year 2009: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000)
• Keywords: 免疫学 / ANCA関連血管炎 / 糸球体腎炎 / 量子ドット / 自己抗体 / 好中球

Research Abstract

1.多光子励起顕微鏡を用いたマウス腎糸球体観察法の確立
昨年度作製法を確立したmaMPOを量子ドット(Qdot)で標識したもの(maMPO-Qdot)を調製し、簡易的に倒立型蛍光顕微鏡で、maMPO-Qdot投与後におけるその腎臓内分布を凍結切片上で観察。その結果、微弱ながら腎臓におけるmaMPO-Qdotの蛍光を観察したが、傾向強度は微弱であった。そこで現在、量子ドット以外に通常の有機蛍光化合物も利用したmaMPOをラベリングしたmaMPOの生体内分布を継続中。
2.maMPOの腎炎誘導活性評価
maMPOとLPSの併用によるC57BL/6マウスの半月体性糸球体腎炎モデルについて、腎臓切片のHE染色・PAS染色・蛍光免疫染色、腎臓中のmRNA発現の定量PCR解析を行った。その結果、LPSの単独投与によって、主に好中球と考えられるGr-1+細胞の糸球体への浸潤が見られたが、maMPOの単独投与ではそのような変化が見られなかった。また、好中球、マクロファージの浸潤に関与する接着分子ICAM-1、ケモカインKC、MCP-1などの腎臓におけるmRNA発現を検討したところ、LPSの投与によって有意に増加することを確認した。従って、LPSによる好中球浸潤に加え、maMPO投与による好中球の活性化が血管傷害の主たる原因であることが推察された。
3.In vitroにおける糸球体血管内皮細胞、maMPO、好中球の相互作用
maMPOによる糸球体血管内皮細胞の直接的活性化メカニズムに関わる新規抗原分子Moesinを同定し、maMPOがMoesinに交差反応で結合。血管内皮細胞に活性化シグナルを伝達している事を明らかにした。

Research Products

• [Journal Article] Direct activation of glomerular endothelial cells by anti-moesin activity of anti-myeloperoxidase antibody (2011)
  • Author(s): Nagao T
  • Journal Title: Nephrology Dialysis Transplantation Volume: (in press)
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] 血管炎についての最近の話題-基礎研究の立場から- (2011)
  • Author(s): 鈴木和男
  • Journal Title: 医学のあゆみ Volume: 236 Pages: 791-798
• [Journal Article] Reduction of MPO-ANCA epitopes in SCG/Kj mice by 15-deoxyspergualin treatment restricted by IgG2b associated with crescentic glomerulonephritis (2010)
  • Author(s): Tomizawa K
  • Journal Title: Rheumatology(Oxford) Volume: 49 Pages: 1245-1256
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] ANCA関連血管炎とneutrophil extracellular traps (NETs) (2010)
  • Author(s): 長尾朋和
  • Journal Title: リウマチ科 Volume: 43 Pages: 414-419
• [Journal Article] Reduction of MPO-ANCA epitopes in SCG/Kj mice by 15-Deoxyspergualin treatment restricted by IgG2b associated with crescentic glomerulonephritis (2010)
  • Author(s): Kazuo Tomizawa
  • Journal Title: Rheumatology (In press)
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Screening of epithelial cell-adhesive peptides from fibronectin loop region and its cell specificity (2009)
  • Author(s): Chiaki Kaga
  • Journal Title: J Chem.Engineering Japan 4 Pages: 298-302
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] MPO-ANCA関連血管炎と血管内皮細胞 (2009)
  • Author(s): 長尾朋和
  • Journal Title: 腎と透析 68 Pages: 89-93
• [Journal Article] 好中球機能異常による血管炎・腎炎 (2009)
  • Author(s): 長尾朋和
  • Journal Title: 細胞 41 Pages: 60-63
• [Journal Article] MPO-ANCA関連血管炎―発症機構解析・モデルマウス・新たな治療法 (2009)
  • Author(s): 長尾朋和
  • Journal Title: 炎症と免疫 17 Pages: 707-713
• [Presentation] Treatments for MPO-ANCA-associated vasculitis in SCG/Kj mouse (2010)
  • Author(s): Kusunoki R
  • Organizer: 14^<th> International Congress of Immunology
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2010-08-27
• [Presentation] Murine crescentic glomerulonephritis model using anti-MPO and anti-LAMP2 antibodies (2010)
  • Author(s): Nagao T
  • Organizer: 14^<th> International Congress of Immunology
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2010-08-24
• [Presentation] Mechanism of neutrophil extracellular traps formation by anti-myeloperoxidase antibodies (2010)
  • Author(s): Suzuki K
  • Organizer: 14^<th> International Congress of Immunology
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2010-08-24
• [Presentation] MPO-ANCA関連血管炎モデルにおけるLPSの役割 (2010)
  • Author(s): 長尾朋和
  • Organizer: 第21回日本生体防御学会学術集会
  • Place of Presentation: 仙台
  • Year and Date: 2010-07-23
• [Presentation] Development of murine crescentic glomerulonephritis model using anti-MPO and anti-LAMP-2 antibodies (2010)
  • Author(s): 長尾朋和
  • Organizer: Inflammation Program Seminar
  • Place of Presentation: 千葉
  • Year and Date: 2010-01-15
• [Presentation] Association of risk epitopes of MPO-ANCA with renal failure in SCG/Kj mice showing crescentic glomerulonephritis (2009)
  • Author(s): Kazuo Tomizawa
  • Organizer: 6th International Human Peroxidase Meeting
  • Place of Presentation: North Carolina, USA
• [Presentation] MPO-ANCAが直接誘導する糸球体血管内皮細胞活性化の分子機構 (2009)
  • Author(s): 長尾朋和
  • Organizer: 第52回日本腎臓学会学術総会、シンポジウム
  • Place of Presentation: 横浜
• [Presentation] Risk Epitopes of MPO-ANCA in SCG/Kj mice (2009)
  • Author(s): Kazuo Tomizawa
  • Organizer: 14th International Vasculitis and ANCA Workshop
  • Place of Presentation: Lund, Sweden Copenhagen, Denmark
• [Presentation] Dietary enrichment with eicosapentanoic acid(EPA) prevents antineutrophil cytoplasmic antibody(ANCA)-associated vasculitis (2009)
  • Author(s): Junichi Hirahashi
  • Organizer: 14th International Vasculitis and ANCA Workshop
  • Place of Presentation: Lund, Sweden Copenhagen, Denmark
• [Presentation] Risk Epitopes of MPO-ANCA in patients with MPA in Japan (2009)
  • Author(s): Kazuo Suzuki
  • Organizer: 14th International Vasculitis and ANCA Workshop
  • Place of Presentation: Lund, Sweden Copenhagen, Denmark
• [Presentation] 抗MPO抗体刺激による活性化血管内皮細胞由来のケモカインの役割 (2009)
  • Author(s): 長尾朋和
  • Organizer: 第15回MPO研究会
  • Place of Presentation: 栃木
• [Presentation] A mouse model of pauci-immune glomerulonephritis induced by monoclonal anti-LAMP-2 antibody (2009)
  • Author(s): 長尾朋和
  • Organizer: 第39回日本免疫学会総会・学術集会
  • Place of Presentation: 大阪
• [Presentation] Involvement of Interleukin-6 in RPGN of SCG/Kj mice (2009)
  • Author(s): Reina Kusunoki
  • Organizer: 第39回日本免疫学会総会・学術集会
  • Place of Presentation: 大阪