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細胞内脂肪酸代謝産物アシルCoAの測定法の開発

Research Project

Project/Area Number 21930019
Research Category

Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field 基礎医学
Research InstitutionNational Institute for Physiological Sciences

Principal Investigator

斉藤 久美子  National Institute for Physiological Sciences, 技術課, 技術職員

Project Period (FY) 2009
Project Status Completed (Fiscal Year 2009)
Budget Amount *help
¥590,000 (Direct Cost: ¥590,000)
Fiscal Year 2009: ¥590,000 (Direct Cost: ¥590,000)
KeywordsアシルCoA / 脂肪酸代謝 / non-RI測定
Research Abstract

肥満・糖尿病の原因として糖・脂質代謝異常があげられる。肥満・糖尿病の発症過程において各臓器の糖・脂質代謝変化を測定することは、肥満・糖尿病の発症メカニズム、治療法の開発に重要である。現在、各臓器の代謝変化をin vivoで解析するには、放射性化合物を用いた方法で行い、特別な実験施設を必要とする。そこで、この問題に対処するため、非放射性試薬(non-RI)による糖・脂質代謝測定法の開発を行っている。
最近の研究で、脂肪酸合成系の一分子であるアシルCoAが摂食や代謝調節に関わるという報告があり、本研究では、この摂食の鍵分子であるアシルCoAのnon-RIによる微量測定法の開発を行った。測定は、酵素反応を利用し、酵素反応による反応産物を測定した。試料中のアシルCoAをアシルCoAオキシダーゼで酸化し、過酸化水素(H_2O_2)を生成する。そのH_2O_2をペルオキシダーゼと作用させ、比色にて定量した。さらにこの測定系で、アシルCoAシンセターゼを用いることにより脂肪酸量を測定でき、測定した脂肪酸量から内因性のアシルCoA量を差し引くことで試料中の脂肪酸量を算出することにした。最初に酵素反応系の至適条件の検討を行い、脂肪酸、アシルCoA(Palmitoyl-CoA)の標準直線を作成した。次に組織からの脂肪酸、アシルCoAの抽出方法及び測定条件の検討を行った。組織蛋白量約1mgの試料より、non-RIでアシルCoA量の測定を可能にした。しかし、測定に高濃度(約1mg蛋白)の組織量を要するため、バックグラウンドが上昇する傾向にある。そこで現在、バックグラウンドを下げるため、内因性物質由来の酵素反応を除く方法を検討し、より少ない組織量での測定を可能にするため、さらなる改良を行っている。

Report

(1 results)
  • 2009 Annual Research Report
  • Research Products

    (1 results)

All 2010

All Presentation (1 results)

  • [Presentation] Non-RI(非放射性)による代謝解析2010

    • Author(s)
      斉藤久美子
    • Organizer
      第32リノシ生理に畝技術研究会
    • Place of Presentation
      岡崎コンファレンスセンター
    • Year and Date
      2010-02-19
    • Related Report
      2009 Annual Research Report

URL: 

Published: 2009-04-01   Modified: 2016-04-21  

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