| Project/Area Number |
21H02644
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 47060:Clinical pharmacy-related
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| Research Institution | The University of Tokushima |
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Principal Investigator |
安藤 英紀 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(薬学域), 准教授 (00735524)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
清水 太郎 大阪大学, 微生物病研究所, 特任講師(常勤) (30749388)
石田 竜弘 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(薬学域), 教授 (50325271)
小出 裕之 静岡県立大学, 薬学部, 准教授 (60729177)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥17,550,000 (Direct Cost: ¥13,500,000、Indirect Cost: ¥4,050,000)
Fiscal Year 2023: ¥4,030,000 (Direct Cost: ¥3,100,000、Indirect Cost: ¥930,000)
Fiscal Year 2022: ¥5,330,000 (Direct Cost: ¥4,100,000、Indirect Cost: ¥1,230,000)
Fiscal Year 2021: ¥8,190,000 (Direct Cost: ¥6,300,000、Indirect Cost: ¥1,890,000)
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| Keywords | エキソソーム / 脾臓免疫 / 抗血清 / 膜タンパク抗体 / ポリクローナル抗体 / 結合性評価 / 抗体誘導 / リポソーム / 膜タンパク |
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| Outline of Research at the Start |
抗体医薬の開発において、抗原特異的な抗体を誘導する免疫技術は極めて重要であるが、従来の皮下免疫は立体構造が重要な膜タンパクに対する高活性な抗体を誘導するのが困難である。研究代表者らは以前に、リポソームを用いて抗原を脾臓に直接送達する新規免疫法（脾臓免疫）を考案しており、抗原特異的なIgG抗体を短期間で強く誘導できること、皮下免疫では得られないIgGサブクラスを得られることなどを実証している。本研究課題では、生体内で高い機能を発揮するエキソソームを用い、膜タンパクを発現させたエキソソームを脾臓免疫に応用することで、膜タンパクに対する高活性な抗体を世界で初めて誘導することを目指す。
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| Outline of Annual Research Achievements |
HepG2細胞を4日間培養し、培養上清を超遠心することにより、エクソソーム（Exo）を回収した。Exo懸濁液とPEG脂質溶液を混合することで、PEG修飾Exo（PEG-Exo）を調製した。脾臓免疫として、BALB/cマウスに空のポリエチレングリコール（PEG）修飾リポソームを静脈内投与し、その3日後にPEG-Exoを静脈内投与した。対照群として、HepG2細胞とフロイントアジュバントを混合したエマルジョンを皮下投与した（皮下免疫）。それぞれ2週間間隔で合計2回免疫し、得られた抗血清を用いて、HepG2細胞由来タンパク質に対する結合性を全自動シンプルウェスタンシステム（Wes）において評価した。皮下免疫で得られた抗血清ではバンドがほとんど検出されなかったのに対し、脾臓免疫で得られた抗血清ではHepG2細胞由来のタンパク質に対する多くのバンドが認められた。次に、HepG2細胞への結合性を評価した。ガラスボトムディッシュに播種したHepG2細胞に、それぞれの抗血清を添加し、蛍光色素であるAlexa Fluor 488で標識された2次抗体を添加することで染色を行い、蛍光顕微鏡で観察を行った。その結果、皮下免疫で得られた抗血清ではHepG2細胞表面への結合性が認められなかったのに対し、脾臓免疫で得られた抗血清においてはHepG2細胞表面への強い結合性を示すことが明らかとなった。また、別に播種したHepG2細胞を回収し、それぞれの抗血清を添加して同様の2次抗体で染色した後にフローサイトメトリーで解析したところ、免疫染色と同様に脾臓免疫で得られた抗血清でのみ細胞を認識する抗体が誘導されていることを示した。これらのことより、我々の脾臓免疫技術を駆使してExoを脾臓免疫することで、ホスト細胞の膜表面に発現するタンパクに対する抗体を効率的に誘導可能であることが示された。
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| Research Progress Status |
令和5年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和5年度が最終年度であるため、記入しない。
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