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哺乳類腸呼吸メカニズムの理解と制御

Research Project

Project/Area Number 21H04822
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (A)

Allocation TypeSingle-year Grants
Section一般
Review Section Medium-sized Section 53:Organ-based internal medicine and related fields
Research InstitutionTokyo Medical and Dental University

Principal Investigator

武部 貴則  東京医科歯科大学, 統合研究機構, 教授 (20612625)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 米山 鷹介  東京医科歯科大学, 統合研究機構, 助教 (10748289)
Project Period (FY) 2021-04-05 – 2025-03-31
Project Status Granted (Fiscal Year 2024)
Budget Amount *help
¥41,860,000 (Direct Cost: ¥32,200,000、Indirect Cost: ¥9,660,000)
Fiscal Year 2024: ¥9,750,000 (Direct Cost: ¥7,500,000、Indirect Cost: ¥2,250,000)
Fiscal Year 2023: ¥9,750,000 (Direct Cost: ¥7,500,000、Indirect Cost: ¥2,250,000)
Fiscal Year 2022: ¥9,750,000 (Direct Cost: ¥7,500,000、Indirect Cost: ¥2,250,000)
Fiscal Year 2021: ¥12,610,000 (Direct Cost: ¥9,700,000、Indirect Cost: ¥2,910,000)
Keywords腸呼吸 / 副呼吸 / オルガノイド
Outline of Research at the Start

ドジョウなどの水棲生物の一部は、泥池における低酸素環境を生き抜くために、副呼吸機構として、肛門側近傍の腸を活用して酸素換気を行う「腸呼吸」を有している。最近、研究代表者らは、この腸呼吸システムを活用することで、マウスやブタなどの哺乳類において、致死的な低酸素条件下でも生存可能である、という驚くべき知見を得た。本研究では、「進化的に廃絶した機能と考えられてきた腸呼吸が、なぜ哺乳類でも機能するのか?」という問いに迫る。本研究を通じて、腸呼吸の生物学的理解を深めるとともに、肺移植に代替する治療法確立に貢献する革新的な技術の創出につなげる。

Outline of Annual Research Achievements

前年度に確立した大動物モデルを用いて、パーフルオロカーボン(PFC)による酸素化効果の発現に重要な血管を探索した。すなわち、麻酔・筋弛緩剤を投与した状態で人工呼吸管理によって呼吸機能を調節し、自発呼吸(経肺的な換気)の影響を最小限にコントロールした形で低酸素状態に誘導した呼吸不全モデルブタに対して、動脈に加えて複数の静脈血行路の酸素や二酸化炭素分圧を評価した。その結果、PFCを腸管内に投与している間は、低酸素状態の改善効果だけでなく二酸化炭素の減少効果(換気効果)をもたらすことが判明した。さらに、その効果は、PFCの排泄によって元の状態に戻ることから、PFCの投与によって改善しているという証左を得た。次に、複数の静脈血行路に留置したカテーテルを用いて、局所での酸素化状態を評価した結果、門脈を優位として腸管から流出する複数の静脈血を酸素化することが示された。

また、前年度に取得したマウスでのscRNA-seqデータのバイオインフォマティクス解析を進めた。直腸から肛門管に至る領域を構成する細胞種のアノテーションを実施した後に、酸素化したPFCの投与依存的に遺伝子発現を示すクラスターとその遺伝子機能を探索した。その結果、酸素化したPFCを投与した条件でのみ出現する腸上皮細胞群の存在を同定し、それらの上皮細胞に特徴的な遺伝子セットを明らかにした。また、血管内皮細胞の多様性について、肺との比較の観点から検討し、ガス換気に特化した肺胞血管内皮細胞で特異的に発現する遺伝子のいくつかが直腸に配向する血管内皮細胞にも発現していることを見出した。

腸呼吸に最適化された腸オルガノイドのエンジニアリングに関しては、in vivoでの移植条件を検討し、腸管周囲にヒト血管内皮細胞を付加することが可能な基盤技術を構築した。現在、in vitroとin vivoの両方において、腸管機能の改変を指向した化合物探索実験を進めている。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

1: Research has progressed more than it was originally planned.

Reason

大動物を用いた実験から哺乳類腸呼吸の局所酸素化動態が明らかになり、その作用機序や定量的理解へ大きく前進した。得られた成果は国際誌iScienceへ掲載された。また、マウスを用いたscRNA-seq解析から、従来全く記述されてこなかった腸管でのガス換気に関連した分子機序の存在が明らかになりつつあり、当初計画を超えて順調に進展していると考えている。

Strategy for Future Research Activity

マウスscRNA-seq解析をさらに発展させ、肺との相同性・相違性の観点から、腸管上皮細胞や血管内皮細胞における分子レベルでの比較解析を実施する。さらに、導出された特徴的な分子については、形態学的な解析を行い、ガス換気組織としての腸の理解を深める。
腸オルガノイドのエンジニアリングについては、in vitroとin vivoの両方を並行して候補薬剤処理の有効性検証を進める。in vitroでの酸素移行評価系の構築が困難であったことから、上皮細胞の形態変化や局所血流量などのサロゲートを設定し、腸呼吸の酸素化効率を操作可能な技術基盤を開発する。

また、副呼吸システムの人為創出を目指して、腸オルガノイドの移植操作を最適化するとともに、体外からの投与が可能となるように、移植後の二期的手術のプロトコルについても検討を進める。

Report

(3 results)
  • 2022 Annual Research Report
  • 2021 Comments on the Screening Results   Annual Research Report
  • Research Products

    (88 results)

All 2023 2022 2021

All Journal Article (17 results) (of which Int'l Joint Research: 17 results,  Peer Reviewed: 17 results,  Open Access: 9 results) Presentation (71 results) (of which Int'l Joint Research: 10 results,  Invited: 69 results)

  • [Journal Article] Enteral liquid ventilation oxygenates a hypoxic pig model2023

    • Author(s)
      Tasuku Fujii,Yosuke Yoneyama,Akiko Kinebuchi,Hiroshi Date,Kimitoshi Nishiwaki,Takanori Takebe
    • Journal Title

      iScience

      Volume: 26 Issue: 3 Pages: 106142-106142

    • DOI

      10.1016/j.isci.2023.106142

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  • [Journal Article] A Pillar and Perfusion Plate Platform for Robust Human Organoid Culture and Analysis2023

    • Author(s)
      Kang SY, Kimura M, Shrestha S, Lewis P, Lee S, Cai Y, Joshi P, Acharya P, Liu J, Yang Y, Sanchez JG, Ayyagari S, Alsberg E, Wells JM, Takebe T, Lee MY.
    • Journal Title

      bioRxiv

      Volume: -

    • DOI

      10.1101/2023.03.11.532210

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  • [Journal Article] Cell membrane fluidity and ROS resistance define DMSO tolerance of cryopreserved synovial MSCs and HUVECs2022

    • Author(s)
      Mizuno Mitsuru、Matsuzaki Takahisa、Ozeki Nobutake、Katano Hisako、Koga Hideyuki、Takebe Takanori、Yoshikawa Hiroshi Y.、Sekiya Ichiro
    • Journal Title

      Stem Cell Research & Therapy

      Volume: 13 Issue: 1 Pages: 177-177

    • DOI

      10.1186/s13287-022-02850-y

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  • [Journal Article] Anniversary reflections: Inspiring discoveries and the future of the field2022

    • Author(s)
      Lancaster M, Morris S, Takebe T, Qian L, Gao S, Huch M
    • Journal Title

      Cell Stem Cell

      Volume: 29 Issue: 6 Pages: 879-881

    • DOI

      10.1016/j.stem.2022.05.005

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    • Author(s)
      Matsuzaki Takahisa、Shimokawa Yuko、Koike Hiroyuki、Kimura Masaki、Kawano Yuma、Okuma Nao、Kawamura Ryuzo、Yoneyama Yosuke、Furuichi Yasuro、Hakuno Fumihiko、Takahashi Shin-Ichiro、Nakabayashi Seiichiro、Okamoto Satoshi、Nakauchi Hiromitsu、Taniguchi Hideki、Takebe Takanori、Yoshikawa Hiroshi Y.
    • Journal Title

      iScience

      Volume: 25 Issue: 10 Pages: 105109-105109

    • DOI

      10.1016/j.isci.2022.105109

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    • Author(s)
      Kimura Masaki、Iguchi Takuma、Iwasawa Kentaro、Dunn Andrew、Thompson Wendy L.、Yoneyama Yosuke、...、Takebe Takanori
    • Journal Title

      Cell

      Volume: 185 Issue: 22 Pages: 4216-4232.e16

    • DOI

      10.1016/j.cell.2022.09.031

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    • Author(s)
      Kishimoto K, Iwasawa K, Sorel A, Ferran-Heredia C, Han L, Morimoto M, Wells JM, Takebe T, Zorn AM.
    • Journal Title

      Nat Protoc

      Volume: 17 Issue: 11 Pages: 2699-2719

    • DOI

      10.1038/s41596-022-00733-3

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    • Author(s)
      Lee IS, Takebe T.
    • Journal Title

      Curr Opin Genet Dev

      Volume: 75 Pages: 101925-101925

    • DOI

      10.1016/j.gde.2022.101925

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  • [Journal Article] Correction of a Factor VIII genomic inversion with designer-recombinases2022

    • Author(s)
      Felix Lansing, Liliya Mukhametzyanova, Teresa Rojo-Romanos, Kentaro Iwasawa, Masaki Kimura, Maciej Paszkowski-Rogacz, Janet Karpinski, Tobias Grass, Jan Sonntag, Paul Martin Schneider, Ceren G?nes, Jenna Hoersten, Lukas Theo Schmitt, Natalia Rodriguez-Muela, Ralf Kn?fler, Takanori Takebe & Frank Buchholz
    • Journal Title

      Nature Communications

      Volume: 13 Issue: 1 Pages: 422-422

    • DOI

      10.1038/s41467-022-28080-7

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  • [Journal Article] Eicosatetraynoic Acid and Butyrate Regulate Human Intestinal Organoid Mitochondrial and Extracellular Matrix Pathways Implicated in Crohn’s Disease Strictures2022

    • Author(s)
      Jurickova I, Bonkowski E, Angerman E, Novak E, Huron A, Akers G, Iwasawa K, Braun T, Hadar R, Hooker M, Han S, Cutler D, Okou D, Kugathasan S, Jegga A, Wells J, Takebe T, Mollen K, Haberman Y, Denson L
    • Journal Title

      Inflammatory Bowel Diseases

      Volume: 28 Issue: 7 Pages: 988-1003

    • DOI

      10.1093/ibd/izac037

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  • [Journal Article] Mammalian enteral ventilation ameliorates respiratory failure2021

    • Author(s)
      Okabe Ryo、Chen-Yoshikawa Toyofumi F.、Yoneyama Yosuke、Yokoyama Yuhei、Tanaka Satona、Yoshizawa Akihiko、Thompson Wendy L.、Kannan Gokul、Kobayashi Eiji、Date Hiroshi、Takebe Takanori
    • Journal Title

      Med

      Volume: 2 Issue: 6 Pages: 773-783

    • DOI

      10.1016/j.medj.2021.04.004

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  • [Journal Article] POLYseq: A poly(β-amino ester)-based vector for multifunctional cellular barcoding2021

    • Author(s)
      Dunn A, Cai Y, Iwasawa K, Kimura M, Takebe T
    • Journal Title

      Stem Cell Reports

      Volume: 16 Issue: 9 Pages: 2149-2158

    • DOI

      10.1016/j.stemcr.2021.07.020

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    • Author(s)
      Naraoka Yuna、Mabuchi Yo、Yoneyama Yosuke、Suto Eriko Grace、Hisamatsu Daisuke、Ikeda Mami、Ito Risa、Nakamura Tetsuya、Takebe Takanori、Akazawa Chihiro
    • Journal Title

      Cells

      Volume: 10 Issue: 9 Pages: 2499-2499

    • DOI

      10.3390/cells10092499

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  • [Journal Article] Self-organized yolk sac-like organoids allow for scalable generation of multipotent hematopoietic progenitor cells from human induced pluripotent stem cells2021

    • Author(s)
      Naritaka Tamaoki, ..., Masaki Kimura, Takanori Takebe, Jizhong Zou, David F. Stroncek, Pamela G. Robey, Michael J. Kruhlak, Nicholas P. Restifo, Raul Vizcardo
    • Journal Title

      bioRxiv

      Volume: 3 Pages: 100460-100460

    • DOI

      10.1101/2021.04.25.441298

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  • [Journal Article] Organoid transplant approaches for the liver2021

    • Author(s)
      Reza HA, Okabe R, Takebe T.
    • Journal Title

      Transplantation International

      Volume: 34 Issue: 11 Pages: 2031-2045

    • DOI

      10.1111/tri.14128

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  • [Journal Article] Organogenesis in_vitro2021

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      Iwasawa K, Takebe T.
    • Journal Title

      Curr Opin Cell Biol

      Volume: 73 Pages: 84-91

    • DOI

      10.1016/j.ceb.2021.06.007

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  • [Journal Article] Enteral ventilation technology to combat severe respiratory failure2021

    • Author(s)
      YONEYAMA Yosuke、OKABE Ryo、TAKEBE Takanori
    • Journal Title

      Translational and Regulatory Sciences

      Volume: 3 Issue: 3 Pages: 93-97

    • DOI

      10.33611/trs.2021-015

    • NAID

      130008133922

    • ISSN
      2434-4974
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Published: 2021-04-28   Modified: 2024-06-24  

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