マラリア原虫メロゾイト形成期のターゲトーム解析による赤血球侵入・感染機構の解明
Project/Area Number |
21K06986
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Section | 一般 |
Review Section |
Basic Section 49040:Parasitology-related
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Research Institution | Mie University |
Principal Investigator |
西 翔 三重大学, 医学系研究科, 助教 (50880051)
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Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
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Keywords | マラリア原虫 / ターゲトーム / メロゾイト / 侵入・感染 |
Outline of Research at the Start |
マラリア原虫のメロゾイトは赤血球への侵入・感染を行う極めて重要な細胞ステージである。申請者はこれまでに、メロゾイト形成期に必須である3種のAP2ファミリー転写因子を発見した。そして、これらの転写因子の標的遺伝子解析から、マラリア原虫メロゾイト形成の分子基盤を理解するうえで非常に有力な情報が得られることを構想した。本研究の成果は、生物学基礎研究の発展のみならず、新たな薬剤・ワクチン標的候補遺伝子発見にもつながり、その波及効果は極めて大きいものとなる。
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Outline of Annual Research Achievements |
本年度は、ネズミマラリア原虫Plasmodium bergheiのメロゾイト形成期特異的転写因子AP2-M3について、GFP融合遺伝子発現株を作製し、その発現パターンを調べた。さらに、ChIP-seq解析により、AP2-M3の標的遺伝子を同定した。その中には、原虫内膜構造やロプトリーに関連する遺伝子が多く含まれていた。そして、標的遺伝子解析の結果を3種のメロゾイト形成期特異的転写因子AP2-M1、AP2-M2、AP2-M3の間で比較することで、メロゾイト形成期において、遺伝子発現がどのような順序で活性化されていくかの全体像を得ることができた。現在はこの結果をもとに、マラリア原虫のメロゾイト形態形成や宿主細胞侵入に関連する新規の遺伝子探索を行っており、いくつかの有力な候補遺伝子を発見している。これらについてはGFP融合遺伝子発現株を作製することで細胞内での局在を明確にするとともに、DiCre-loxPシステムを用いた条件的ノックアウト技術により、その機能を調べていく予定である。 以上の結果に加え、AP2-M1については、DNA結合ドメインであるAP2ドメインのGST融合リコンビナントタンパク質を用いてDIP-seqを行い、ChP-seqから予想された結合配列との一致を確認した。今後、その他2つの転写因子についても結合配列をin vitroで確認するとともに、それらの配列のcisエレメントとしての機能をChIP-qPCRやセントロメアプラスミドを用いたレポーターアッセイによって評価する。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
実験は予定通りに進行している。また、おおよそ期待していたものに近いデータが得られている。
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Strategy for Future Research Activity |
今後も研究費申請当初の計画に沿って実験を進めていく。具体的にはAP2-M2とAP2-M3についてDIP-seqなどにより結合配列を確認する。また、同定した結合配列のcisエレメントとしての機能をChIP-qPCRやセントロメアプラスミドを用いたレポーターアッセイによって評価する。比較ターゲトームの情報をもとに同定した新規侵入関連遺伝子についてはGFP融合遺伝子発現株を作製することで細胞内での局在を調べるとともに、DiCre-loxPシステムを用いた条件的ノックアウト技術により、その機能を調べていく。
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Report
(2 results)
Research Products
(3 results)