| Project/Area Number |
21K07340
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 52010:General internal medicine-related
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
内海 健 九州大学, 医学研究院, 教授 (80253798)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
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| Keywords | 高感度検出 / 核酸増幅 / 金属キレータ / ピロリン酸 / 核酸増幅法 / 酵素法 / 金属錯体 |
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| Outline of Research at the Start |
現在，ウイルスや細菌の検出，また，癌やその他の疾患の潜在的なバイオマーカーとして核酸に着目した検査が臨床において用いられおり，今後さらにその需要が高まると予想される。核酸を用いた検査には，目的とする遺伝子の増幅が不可欠であり，その多くが蛍光を標識した高価なプローブを用いた検出法であることから，特別な機器が必須となる。そこで，本研究では，核酸の増幅時に生成されるピロリン酸に着目し，酵素を用いて低価格で高感度に検出することで，特別な機器や分析環境条件を問わない，かつ，目視にて検出可能な，より簡便な核酸増幅量の検出技術と核酸定量の開発を試み，本法の技術応用の可能性について探索・検証を行うこととする。
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| Outline of Final Research Achievements |
Various amplification techniques have been developed and put to practical use in nucleic acid-based testing. However, the development of technology for detecting the degree of amplification has been mainly based on improved probe detection using fluorescent labeling, and expensive equipment has been indispensable. Therefore, we focused on pyrophosphate, which is produced during nucleic acid amplification, and attempted to develop a simpler technique for detecting the amplified amount of nucleic acids. As a result, we established a high-sensitivity detection method for pyrophosphate and confirmed that the sensitivity of this method is comparable to existing nucleic acid amplification methods. Taking advantage of this simple and rapid detection characteristic, our method is expected to be applied to gene-related tests for disasters including infectious diseases in the future.
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| Academic Significance and Societal Importance of the Research Achievements |
本検討の成果として、ピロリン酸の高感度検出系の構築に至った。また、既存の核酸増幅技術（PCR法）との比較検討において、本法が核酸の増幅の有無を検出するにあたり遜色ない感度を有していることを確認した。本検討内容はAnalytical Biochemistryへの論文掲載に至った。
本技術は、迅速かつ簡便な新しい核酸増幅定性・定量検出システムとして，緊急時・災害時の電気，水などのライフラインの乏しい医療現場での感染症などの遺伝子検査キッ トの検出系全般への高感度技術の応用展開への可能性を示すものであると考える。
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