ヒト化マウスによるドナー特異的抗体産生免疫プロファイリングの解明と個別化医療

Research Project

Project/Area Number	21K08632
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Allocation Type	Multi-year Fund
Section	一般
Review Section	Basic Section 55010:General surgery and pediatric surgery-related
Research Institution	Aichi Medical University
Principal Investigator	野田貴幸愛知医科大学, 大学病院, 薬剤師 (50817088)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	岩崎研太愛知医科大学, 医学部, 准教授 (10508881) 小林孝彰愛知医科大学, 医学部, 教授 (70314010)
Project Period (FY)	2021-04-01 – 2024-03-31
Project Status	Completed (Fiscal Year 2023)
Budget Amount *help	¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000) Fiscal Year 2023: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000) Fiscal Year 2022: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000) Fiscal Year 2021: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
Keywords	ヒト化マウス / HLA / B細胞培養 / DSA / レパトア
Outline of Research at the Start	免疫抑制剤の進歩により臓器移植の短期正着率は格段に向上しているが、長期生着については改善傾向にない。特に慢性抗体関連型拒絶反応の早急な対策が求められ、ドナー特異的HLA抗体産生メカニズムの解明と産生B細胞の同定、産生されたDSAの制御法の開発は臨床的に重要な課題となっている。本研究では慢性拒絶反応の早期診断を可能とする移植後のDSAモニタリング法の確立とDSA産生B細胞の同定・制御を目的として、末梢血単核球からのDSA早期検出およびヒト化マウスを用いて体内でのDSA産生B細胞の挙動解析を行い、さらにDSA産生B細胞受容体のレパトア解析から得られる知見をもとに、新たな治療展開を提示する。
Outline of Annual Research Achievements	本研究では、慢性抗体関連型拒絶反応の対策として、ドナー特異的抗HLA抗体（DSA）の産生メカニズムを研究する動物実験モデルとなるDSA抗体産生ヒト化マウスモデルの開発を行っている。ヒトPBMCを腹腔内投与し、ヒト細胞の生着はflow cytometryで確認した。マウス末梢血中のヒトCD3陽性細胞が著増し、GVHD発症との関連を認めた。移植患者PBMC 移入によりヒト免疫細胞の再構築が確認されたマウスにおいて、血清中DSAと同様のアリルが検出された。その一方で、HLA型の異なる健常人PBMCで感作したところ、全例でヒトIgG抗体が検出された。その一部は、DSAであったが、多くはnonDSAであった。また、複数回、検討を行ったが、再現性が乏しかった。これらの結果から移植患者PBMC中のメモリー細胞の存在が重要であると考えられた。健常人のPBMCによりDSA産生ヒト化マウスの作製に当たっては、一部HLA抗体が検出されたものの、産生量も少なく作製方法の見直しが必要となった。また、GVHDを早期に発症し、仮にHLA抗体が産生される以前に死亡する可能性があったため、細胞移入後の生存期間の延長も課題となった。そこで、移入細胞数を変えて生存期間を観察したところ、細胞数依存的に生存期間は短くなることを見出した。次に磁気ビーズよって、CD4細胞、naive T細胞、Memory T細胞を除去した細胞を用いて、免疫細胞の種類による生存期間の変化を確認した。naive T細胞を除去した場合、PBMCを移入した際に比べて、1.5倍の生存期間が延長した。引き続き、GVHDを抑制しつつ、メモリー細胞を移入する方法を模索していく予定である。

Report

(3 results)