| Project/Area Number |
22K09179
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 55060:Emergency medicine-related
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| Research Institution | University of Toyama |
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Principal Investigator |
土井 智章 富山大学, 学術研究部医学系, 教授 (00444307)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岡田 英志 岐阜大学, 大学院医学系研究科, 准教授 (30402176)
富田 弘之 岐阜大学, 大学院医学系研究科, 准教授 (50509510)
鈴木 昭夫 岐阜大学, 医学部附属病院, 准教授 (80775148)
手塚 宜行 岐阜大学, 大学院医学系研究科, 特任教授 (90868209)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
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| Keywords | ヒアルロン酸 / 血管内皮 / 血管内皮グリコカリックス |
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| Outline of Research at the Start |
本研究ではヒアルロン酸合成酵素のうちのシェアストレスにより血管内皮細胞上で発現量が変化するという報告のあったHAS2に注目し(Wang G et al. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2020)、Has2を血管内皮特異的にノックアウト (KO) したマウスを用いる。本研究の目的は血管内皮グリコカリックスと炎症細胞動態の関連について以下の3つに分けて行うことである。
血管内皮特異的Has2 KOマウスの各臓器における表現型の検討
血管内皮特異的Has2 KOマウスの血管内皮グリコカリックスの超微形態学的解析
血管炎誘発下での血管内皮特異的Has2 KOマウス表現型の検討
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| Outline of Annual Research Achievements |
血管内皮グリコカリックスは血管内皮細胞の内腔面を覆っている構造物で血管の恒常性維持に重要な役割を果たしている。血管内皮グリコカリックスの構造は血管内皮細胞に結合するプロテオグリカンに陰性電荷を帯びたグリコサミノグリカンが結合し, ヒアルロン酸がそれらの構造物をつないで血管内皮表面を覆うような形で存在している。ヒアルロン酸は、血管内皮グリコカリックスが障害されると血中へ放出されることからグリコカリックスの障害マーカーとして使用されている。本研究では血管内皮特異的にヒアルロン酸をノックアウトしたマウスを用いて、血管内皮上のヒアルロン酸の臓器による局在の相違や炎症病態下での機能を明らかにする。
Has2 flox/floxマウスにVascular Cadherin Specific CRE 強発現マウスを掛け合わせた血管内皮特異的HAS2ノックアウトマウスを作成した。本マウスは胎生致死にならずに誕生し6週齢頃までは特に肉眼的には大きな変化は認められていなかったが、それ以上に成長してくると皮膚のツルゴールが低下し、解析開始を予定していた10週齢では皮膚病変が出現する。そのため成獣になってからタモキシフェン投与によりノックアウトできるマウスを作成するためにVascularCadherin Specific CRE(ERT2)とHas2 flox/floxマウスを掛け合わせて作成した。マウスは問題なく発育し、10週齢となった時にタモキシフェンを0.5mg/gのdoseで隔日で5回腹腔内投与を行ない、3週間後に解析を行った（KOマウス）。コントロールとしてタモキシフェンの代わりにコーンオイルを投与したマウスを使用した（Cont）。KOマウスではContに比べて腸管組織において浮腫が著明であり、腸管における微小循環障害が生じていることが確認された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
KOマウスが作成できたが解析はこれからである。
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| Strategy for Future Research Activity |
ノックアウトマウス作成が別記載のように困難を極めたため、数多くの実験を行うことは難しい状況下ではあるが、次年度はこのNOマウスの敗血症モデルを用いて、各臓器（腎臓、肺、心臓を検討している）の血管内皮障害の程度を電子顕微鏡を用いて、解析を進めて行く予定である。
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