Modification of rattle snake venom derived blood clot dissolver, Alfimeprase, by fusion with C-terminal domain of habu-HR1a and fibrin-targeting peptide

• Project/Area Number: 23590199
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Section: 一般
• Research Field: Medical pharmacy
• Research Institution: Teikyo Heisei University
• Principal Investigator: ISHIDA Isao 帝京平成大学, 薬学部, 教授 (00415556)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): IKEMOTO Mamoru 帝京平成大学, 薬学部, 准教授 (90311331)
• Project Period (FY): 2011 – 2013
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2013)
• Budget Amount: ¥5,330,000 (Direct Cost: ¥4,100,000、Indirect Cost: ¥1,230,000); Fiscal Year 2013: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000); Fiscal Year 2012: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000); Fiscal Year 2011: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000)
• Keywords: バイオテクノロジー / タンパク質 / 酵素 / 血栓溶解剤 / フィブリン分解活性 / 遺伝子組み換えタンパク質 / 組換えDNA / フィブリン分解 / 遺伝子組み換え

Research Abstract

Alfimeprase(A) can digest fibrin directly, and do not produce any plasmin in different from tPA (Activase). Because A can be rapidly trapped by alpha-2 macroglobulin (alfpha-2M) and inactivated in the blood vein, the clinical effect of A in the phase 2 has not been so good to advance its development. We designed the gene in which the C-terminal side of the A was fused with the C-terminal domain (collagen-binding domain) of the HR1a. Considering targeting to fibrin clots, the C-terminal side of the AH gene was fused with the gene for the human plasminogen-derived kringle domain 1 region, which fusion protein is called AHP. The A, AH and AHP genes were inserted into the pE-SUMO vectors and were expressed in the E.coli BL21(DE3)star. Fusion of the HR1a C-teriminal domain with A did not have any effect in terms of avoiding of inactivation by alpha-2M regardless of the presence or absence of the N-terminal SUMO-peptide.

Research Products

• [Journal Article] Affinity maturation of a protein that binds specific epitope using in silico analysis (2013)
  • Author(s): Inoue, H, Suganami, A, Ishida, I, Tamura, Y and Meada, Y
  • Journal Title: J. Biochem Volume: 154(4) Pages: 325-332
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Affinity maturation of a protein that binds specific epitope using in silico analysis. (2013)
  • Author(s): Inoue, H, Suganami, A, Ishida, I, Tamura, Y and Meada, Y.
  • Journal Title: J. Biochem. Volume: 154 Issue: 4 Pages: 325-332
  • DOI: 10.1093/jb/mvt058
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Influence of 50-nm polystyrene particles in inducing cytotoxicity in mice co-injected with carbon tetrachloride, cisplatin, or paraquat (2012)
  • Author(s): Shimizu, Y, Isoda, K, Tezuka, E, Yufu, T, Nagai, Y, Ishida, I, Tezuka M
  • Journal Title: Pharmazie Volume: Aug67(8) Pages: 712-714
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] 研究開発ステージの違いによる人材評価の実際 (2012)
  • Author(s): 石田功
  • Journal Title: 研究開発リーダー Volume: 8巻、No.11(2月) Pages: 12-14
• [Journal Article] Influence of 50-nm polystyrene particles in inducing cytotoxicity in mice co-injected with carbon tetrachloride, cisplatin, or paraquat. (2012)
  • Author(s): Shimizu, Y, Isoda, K, Tezuka, E, Yufu, T, Nagai, Y, Ishida, I, Tezuka M.
  • Journal Title: Pharmazie Volume: 67 Pages: 712-714
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Characterization of human type monoclonal antibodies against the reduced form of hemin binding protein 35 (HBP35) from Porphyromonas gingivalis (2011)
  • Author(s): Shibata, Y, Okano, S, Shiroza, T, Tahara, T, Nakazawa, K, Katoka, S, Ishida, I, Kobayashi, T, Yoshie, H and Abiko, Y
  • Journal Title: J. Periodontal Res Volume: 46(6) Pages: 673-681
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] 製薬業界では新しい創薬技術が求められている (2011)
  • Author(s): 石田功
  • Journal Title: 研究開発リーダー Volume: 8巻、No.5(8月) Pages: 35-37
• [Journal Article] Affinity transfer to human protein by CD3 grafting of camelid VHH (2011)
  • Author(s): Inoue, H, IIhara, A, Takahashi, H, Shimada, I, Ishida, I and Maeda, Y
  • Journal Title: Protein Science Volume: 20 Pages: 1971-1981
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Fully human monoclonal antibody directed to proteolytic cleavage site in SARS coronavirus S protein neutralizes virus in Rhesus macaque SARS model (2011)
  • Author(s): Miyoshi-Akiyama, T, Ishida, I, Fukushi, M, Yamaguchi, K, Matsuoka, Y, Ishihara, T, Tsukahara, M, Hatakeyama, S, Kurosu, H, Itoh, N, Morisawa, A, Yoshinaka, Y, Yamamoto,N, Lianfeng, Z, Chuan, Q, Kirikae, T and Sasazuki, T
  • Journal Title: J Infectious Diseases Volume: 203, June 1 Pages: 1574-1581
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Direct generation of induced pluripotent stem cells from human non-mobilized blood (2011)
  • Author(s): Kunisato, A, Wakatsuki, M, Shimba, H, Ohta, T, Ishida, I and Nagao, K
  • Journal Title: Stem Cells and Development Volume: 20(1) Pages: 159-168
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Fully human monoclonal antibody directed to proteolytic cleavage site in severe acute respiratory syndrome (SARS) coronavirus S protein neutralizes the virus in a rhesus macaque SARS model (2011)
  • Author(s): Miyoshi-Akiyama T, et al
  • Journal Title: J Infect Dis Volume: 203 Issue: 11 Pages: 1574-1581
  • DOI: 10.1093/infdis/jir084
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] ffinity transfer to human protein by CD3 grafting of camelid VHH. (2011)
  • Author(s): Inoue, H, IIhara, A, Takahashi, H, Shimada, I, Ishida, I and Maeda, Y.
  • Journal Title: Protein Science Volume: 20 Issue: 12 Pages: 1971-1981
  • DOI: 10.1002/pro.734
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Generation of TRAIL-receptor 1-specific human monoclonal antibodies by a combination of immunospot array assay on a chip and human Ab-producing mice (2010)
  • Author(s): Jin A, Ozawa T, Tajiri K, Lin Z, Obata T, Ishida I, Kishi H and Muraguchi A
  • Journal Title: Eur. J. Immunol Volume: 40 Pages: 3591-3593
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 遺伝子組換え嫌気性菌による固形がん治療 (2014)
  • Author(s): 石田功
  • Organizer: アカデミックフォーラム
  • Place of Presentation: 東京
• [Presentation] 嫌気性菌をDDSに用いた固形がんに対する新規治療法の開発 (2014)
  • Author(s): 平裕一郎、平郁子、大野まき、西川毅、磯田勝広、池本守、斎藤浩美、石田功
  • Organizer: 日本薬学会第134年会
  • Place of Presentation: 熊本
• [Presentation] 嫌気性菌をDDSに用いた固形がんに対する新規治療法の開発 (2014)
  • Author(s): 平裕一郎、石田功他
  • Organizer: 日本薬学会
  • Place of Presentation: 熊本
• [Presentation] ナノ白金粒子の薬物相互作用に関する検討 (2014)
  • Author(s): 磯田勝広、石田功他
  • Organizer: 日本薬学会
  • Place of Presentation: 熊本
• [Presentation] 嫌気性菌をドラッグデリバリー担体に用いた固形がんに対する新規治療法の開発―in vivoレベルでの解析 (2013)
  • Author(s): 平裕一郎、平郁子、大野まき、磯田勝広、西川毅、池本守、斎藤浩美、石田功
  • Organizer: 第57回日本薬学会関東支部大会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2013-10-26
• [Presentation] 嫌気性菌をドラッグデリバリー担体に用いた固形がんに対する新規治療法の開発―細胞・分子レベルでの解析 (2013)
  • Author(s): 西川毅、平裕一郎、平郁子、大野まき、磯田勝広、池本守、斎藤浩美、石田功
  • Organizer: 第57回日本薬学会関東支部大会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2013-10-26
• [Presentation] 抗体医薬開発、ヒト抗体作製技術から製品開発へ (2013)
  • Author(s): 石田功
  • Organizer: 平成24年度慶応大学薬学研究科がんプロフェッショナルセミナー
  • Place of Presentation: 慶応大学芝共立キャンパス
  • Year and Date: 2013-02-01
  • Invited
• [Presentation] 乳がん細胞におけるカタラーゼの過剰発現がTRAILによる細胞死誘導に与える影響 (2013)
  • Author(s): 吉江唯菜、山崎竜人、小島唯、建部卓也、前田優平、西川毅、石田功
  • Organizer: 第86回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 横浜
• [Presentation] 昆虫培養細胞における無血清培地を用いた組換え蛋白質発現細胞の作製 (2013)
  • Author(s): 高石明那、長谷井智也、神谷力嗣、前田恭央子、下枝里佳子、杉田真美、吉江唯菜、西川毅、石田功
  • Organizer: 第86回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 横浜
• [Presentation] 昆虫培養細胞における無血清培地を用いた組み換えタンパク質発現細胞の作製 (2013)
  • Author(s): 高石明那、石田功他
  • Organizer: 日本生化学会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜
• [Presentation] 乳がん細胞におけるカタラーゼの過剰発現がTRAILによる細胞死誘導に与える影響 (2013)
  • Author(s): 吉江唯菜、石田功他
  • Organizer: 日本生化学会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜
• [Presentation] 「抗体医薬の現状と未来」創薬を指向したタンパク質科学 (2011)
  • Author(s): 石田功
  • Organizer: 日本化学会関東支部講演会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2011-10-21
  • Invited
• [Presentation] こんな考え方で研究をしてきました (2011)
  • Author(s): 石田功
  • Organizer: キリンHDフロンティア技術研(旧基盤研)25周年シンポジウム
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2011-05-14
  • Invited
• [Presentation] 抗体医薬の現状と未来 (2011)
  • Author(s): 石田功
  • Organizer: 日本化学会関東支部講演会(招待講演)
  • Place of Presentation: 日本化学会館（東京）
• [Presentation] ナノサイズシリカ粒子とポリスチレン粒子の薬物相互作用の検討 (2011)
  • Author(s): 清水芳実
  • Organizer: 日本薬学会
  • Place of Presentation: 北海道大学（札幌）
• [Presentation] 非水溶性フラーレン及び水溶性フラーレンの薬物に対する相互作用の検討 (2011)
  • Author(s): 油布朋子
  • Organizer: 日本薬学会
  • Place of Presentation: 北海道大学（札幌）
• [Presentation] 嫌気性菌をドラッグデリバリー担体に用いた固形がんに対する新規治療法の開発ー細胞・分子レベルでの解析
  • Author(s): 西川毅、石田功他
  • Organizer: 日本薬学会関東支部大会
  • Place of Presentation: 帝京大学（東京）
• [Presentation] 嫌気性菌をドラッグデリバリー担体に用いた固形がんに対する新規治療法の開発ーin vivoレベルでの解析
  • Author(s): 平裕一郎、石田功他
  • Organizer: 日本薬学会関東支部大会
  • Place of Presentation: 帝京大学（東京）
• [Presentation] 抗体医薬開発、ヒト抗体作製技術から製品開発へ
  • Author(s): 石田 功
  • Organizer: 平成24年度慶応大学薬学研究科がんプロフェッショナルセミナー
  • Place of Presentation: 慶応大学芝共立キャンパス（東京都）
  • Invited
• [Book] 「ゴールが見えているのに遅れが生じたテーマ評価とGo/Stop判断」、第2章遅れが生じた研究開発テーマの評価と軌道修正、Go/Stop判断、遅れを出さない研究開発組織・プロジェクトのつくり方 (2013)
  • Author(s): 石田功
  • Publisher: 技術情報協会
• [Book] 「ヒト抗体医薬品の開発における潜在ニーズの探索」第5章潜在ニーズ具現化テーマの成功事例、失敗事例、顧客も気づいていない将来ニーズの発掘と新製品開発への活用 (2013)
  • Author(s): 石田功
  • Publisher: 技術情報協会
• [Book] 「抗体医薬開発、ヒト抗体作製技術から製品開発へ」、文科省「がんプロフェショナル養成基盤推進プラン」採択事業、高度がん医療開発を先導する専門家の養成、平成24年度活動報告書 (2013)
  • Author(s): 石田功
  • Publisher: 慶応大学大学院薬学研究科
• [Book] 文科省「がんプロフェショナル養成基盤推進プラン」採択事業、高度がん医療開発を先導する専門家の養成平成24年度活動報告書 (2013)
  • Author(s): 石田功（分担）
  • Total Pages: 174
  • Publisher: 慶応大学大学院薬学研究科
• [Book] 顧客も気づいていない将来ニーズの発掘と新製品開発への活用 (2013)
  • Author(s): 石田功（分担）
  • Total Pages: 603
  • Publisher: 技術情報協会
• [Book] 遅れを出さない研究開発組織・プロジェクトのつくり方 (2013)
  • Author(s): 石田功（分担）
  • Total Pages: 372
  • Publisher: 技術情報協会
• [Book] 第2章4節大量調製-動植物利用、新機能抗体開発ハンドブック (2012)
  • Author(s): 石田功
  • Publisher: NTS出版
• [Book] 抗体医薬の開発動向、抗体医薬品の開発と市場 (2012)
  • Author(s): 石田功
  • Publisher: シーエムシー出版
• [Book] 「未だ実用に使われていない過去の発見、要素技術の掘り起こし」、2022年を見据えた研究テーマ発掘の実践ノウハウ集 (2012)
  • Author(s): 石田功
  • Publisher: 技術情報協会
• [Book] 抗体医薬品の開発と市場 (2012)
  • Author(s): 石田 功（分担）
  • Total Pages: 300
  • Publisher: シーエムシー出版
• [Book] 新機能抗体開発ハンドブック (2012)
  • Author(s): 石田 功（分担）
  • Total Pages: 603
  • Publisher: NTS出版
• [Book] 2022年を見据えた研究テーマ発掘の実践ノウハウ集 (2012)
  • Author(s): 石田 功（分担）
  • Total Pages: 250
  • Publisher: 技術情報協会
• [Book] 「研究開発ステージの違いによる人材評価の実際」、新しい研究開発者の評価と処遇 (2011)
  • Author(s): 石田功
  • Publisher: 技術情報協会
• [Book] 「ベンチャー企業との提携」、「本社技術開発戦略に基づいた画期的な技術の創出」、研究開発「失敗」の実学集 (2011)
  • Author(s): 石田功
  • Publisher: 技術情報協会
• [Book] 新しい研究開発者の評価と処遇 (2011)
  • Author(s): 石田功
  • Total Pages: 210
  • Publisher: 技術情報協会
• [Book] 研究開発「失敗」の実学集 (2011)
  • Author(s): 石田功
  • Total Pages: 249
  • Publisher: 技術情報協会
• [Remarks]
  • URL: http://www.thu.ac.jp
• [Remarks]
  • URL: https://www.thu.ac.jp/teacher_info_admin/profiles/detail/925