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パラフィン切片における免疫組織診断のためのIV型コラーゲンα鎖の解析

Research Project

Project/Area Number 23931019
Research Category

Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field 臨床医学
Research InstitutionOkayama University

Principal Investigator

小見山 高明  岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 技術職員

Project Period (FY) 2011
Project Status Completed (Fiscal Year 2011)
Budget Amount *help
¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
Fiscal Year 2011: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
Keywords抗原賦活 / IV型コラーゲン / 免疫組織染色
Research Abstract

(研究目的)前回の奨励研究では6種類のIV型コラーゲンα(IV)鎖のうち、α3(IV)鎖とα4(IV)鎖の賦活ができなかった。また、前回抗原賦活が良好だった抗体はα(IV)鎖のコラーゲン領域を抗原として作製したものであり、NC1領域を抗原とした抗体の賦活は不良だった。これを改善するため、コラーゲン領域に作用する酵Collagenaseを用いて消化を行い、抗原賦活を試みた。
(研究方法)抗原賦活の条件設定を行うためヒトの腎臓組織を用いた。これを腎生検によく使われるホルマリン固定とアルコールブアン固定の2種類の方法で固定し、通常の方法でパラフィン包埋した。Clostridium histolyticum由来のCollagenase(100units/ml)を2時間及び15時間パラフィン切片に作用させ、抗原賦活を行った。その後、6種類あるIV型コラーゲンα(IV)鎖を識別する24種類のα鎖特異抗体の反応性を確認した。また、反応性の良好なα鎖特異抗体を用いて、パラフィン切片の長期間保管による抗原賦活への影響を検討した。
(研究成果)Collagenaseを用いた抗原賦活によりα1鎖~α6鎖の6種類すべてのα鎖を検出することができた。ヘマトキシリンによる核染も可能であった。抗原賦活は予想通り非コラーゲン領域特異抗体の反応性が高かった。-80℃、デシケーター、室内に約3年間保管したパラフィン切片でCollagenaseによる抗原賦活効果を調べた結果、ホルマリン固定切片では-80℃やデシケーターに保管した切片に比べ室内に保管した切片の反応性低下が明らかだった。アルコールブアン固定切片では保管方法の違いによる反応性に大きな差はなかった。以上、Collagenaseによる抗原賦活により全α(IV)鎖の解析が可能となったことから、本法はこの分野の研究に大きく貢献できることがわかった。さらに、Alport症候群の免疫組織診断においても、α5(IV)鎖だけでなくα3(IV)鎖、α4(IV)鎖の欠損も証明できることから、本法は本症診断に大きく貢献すると考える。

Report

(1 results)
  • 2011 Annual Research Report
  • Research Products

    (4 results)

All 2011

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Presentation (1 results)

  • [Journal Article] Clonal overgrowth of esophageal smooth muscle cells in diffuse leiomyomatosis-Alport syndrome caused by partial deletion in COL4A5 and COL4A6 genes2011

    • Author(s)
      Oohashi T, Naito I, Ueki Y, Yamatsuji T, Permpoon R, Tanaka N, Naomoto Y, Ninomiya Y
    • Journal Title

      Matrix Biology

      Volume: 30 Pages: 3-8

    • Related Report
      2011 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Drosophila type XV/XVIII collagen, Mp, is involved in Wingless distribution2011

    • Author(s)
      Momota R, Naito I, Ninomiya Y, Ohtsuka A
    • Journal Title

      Matrix Biology

      Volume: 30 Pages: 258-266

    • Related Report
      2011 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] 基底膜・IV型コラーゲン・Alport症候群2011

    • Author(s)
      内藤一郎、斎藤健司
    • Journal Title

      Priming biomedicine

      Volume: 4 Pages: 19-30

    • Related Report
      2011 Annual Research Report
  • [Presentation] Collagenaseを用いた抗原賦活によるIV型コラーゲンα3鎖、α4鎖の解析2011

    • Author(s)
      小見山高明
    • Organizer
      第43回日本臨床分子形態学会総会・学術集会
    • Place of Presentation
      大阪医科大学
    • Year and Date
      2011-09-10
    • Related Report
      2011 Annual Research Report

URL: 

Published: 2011-04-06   Modified: 2016-04-21  

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