| Project/Area Number |
23K08845
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
|
| Allocation Type | Multi-year Fund |
|---|
| Section | 一般 |
|---|
| Review Section |
Basic Section 56040:Obstetrics and gynecology-related
|
|---|
| Research Institution | Shiga University of Medical Science |
|---|
Principal Investigator |
村上 節 滋賀医科大学, 医学部, 教授 (20240666)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
辻 俊一郎 滋賀医科大学, 医学部, 准教授 (30601546)
花田 哲郎 滋賀医科大学, 医学部, 助教 (30757216)
林 香里 滋賀医科大学, 医学部, 客員助教 (70569251)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2026-03-31
|
| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2024)
|
| Budget Amount *help |
¥4,810,000 (Direct Cost: ¥3,700,000、Indirect Cost: ¥1,110,000)
Fiscal Year 2025: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000)
|
|---|
| Keywords | 卵巣組織凍結 / がん妊孕 / 卵巣凍結 |
|---|
| Outline of Research at the Start |
がんサバイバーの妊孕性温存療法は、令和４年度より小児・AYA 世代のがん患者等の妊孕性温存療法研究促進事業として、ついに国家戦略に位置づけられた。これに伴い、全都道府県で受け皿が整備され、今後一層普及が進むと予想される。妊孕性温存療法の中でも卵巣の凍結保存は、いまだ研究的要素が大きく、①卵巣再移植の適切な方法が確立されていない、②移植卵巣組織に悪性細胞が含まれる可能性があるなど、解決されるべき課題が残っている。本研究は、本学が保有するカニクイザルを用いて、本来ヒトへの臨床応用の前に行われるべき霊長類による課題解決に取り組むものである。
|
| Outline of Annual Research Achievements |
1．サル安楽死個体からの卵巣凍結
前年度に引き続き、性成熟期サルの安楽死個体より両側卵巣を摘出し凍結に供した。すなわち、事由がある性成熟期サルを麻酔下にチオペンタールにて心停止に至らしめた後、採血を実施。開腹下に子宮および両側付属器を摘出した。
摘出した卵巣組織は、一部はfresh群としてすぐにホルマリン固定を行った。子宮も同様にホルマリン固定を行った。残りの卵巣を、cryotissue kit（kitazato） を用いてガラス化法にて、control群とmTOR阻害薬添加群（添加濃度の低濃度群および高濃度群の2群を用意）に3群にわけて凍結した。
2．凍結融解手技による卵胞喪失評価法の確立
サルの凍結卵巣は入手困難で貴重であるため、予備実験としてマウスモデルを用いて凍結融解後の卵巣評価を行った。融解時は、液体窒素中でCryotissueを開封し、37度に温めたTS液（Thawing Solution）で急速加温する。1分間浸漬し、卵巣組織が遊離するのを確認する。その後DS液（Diluent Solution）に5分、WS1液に10分、WS2液に10分浸漬した。その後一部組織はculture insert上で培養を行う。培養液には、凍結時Rapamysin添加群では引き続き添加をおこなった上で培養を行い、48時間後にホルマリン固定を行った。固定された卵巣は、pAKT、pS6K、TUNELを用いた免疫組織化学染色を実施し、アポトーシスの有無、原始卵胞活性化における経路が阻害されているかどうかを確認した。マウスモデルでは、凍結融解プロセスにおいてmTOR経路が活性化され、いわゆるburn outが中心で原始卵胞の喪失が起こっている可能性が示唆された。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
サルの購入価格高騰の流れは続いており、卵巣の提供を受けることが可能な安楽死個体自体も稀少であることが主たる原因である。
|
| Strategy for Future Research Activity |
引き続きサルの安楽死個体を求め、卵巣凍結を継続し、症例を蓄積する。サルの卵巣凍結症例を蓄積後（n=5を目標とする）に、融解処置を行う。卵巣凍結融解プロセスにおいて、burn out現象がどの程度生じているか、また、mTOR阻害薬を併用することでどの程度burn outを抑制できているかを検証する。前年度に実施および検証したマウスモデルを用いた予備実験を継続し、融解処置およびその後の評価実験の結果を参考にして、サルに対する至適条件を求めたい。
|
