| Project/Area Number |
23K15838
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
|
| Allocation Type | Multi-year Fund |
|---|
| Review Section |
Basic Section 56040:Obstetrics and gynecology-related
|
|---|
| Research Institution | Yamaguchi University |
|---|
Principal Investigator |
白蓋 雄一郎 山口大学, 医学部附属病院, 助教 (00845050)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2026-03-31
|
| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2024)
|
| Budget Amount *help |
¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000)
Fiscal Year 2024: ¥2,600,000 (Direct Cost: ¥2,000,000、Indirect Cost: ¥600,000)
Fiscal Year 2023: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000)
|
|---|
| Keywords | 黄体化 / 顆粒膜細胞 / 卵丘細胞 / シングルセル解析 / インタラクトーム解析 |
|---|
| Outline of Research at the Start |
卵巣ではLHサージを契機に、ゲノムワイドに多くの遺伝子発現が変化し、顆粒膜細胞の機能的変化を引き起こす。この細胞機能の変化は非常に多様であるので、LH刺激の下流には様々なシグナルが存在し、そのシグナルは顆粒膜細胞自身のオートクライン作用によって誘導されるのみならず、近接する卵丘細胞のパラクライン作用によっても誘導されると考えた。本研究では、近年報告された卵巣シングルセルRNA-seqデータを用いて独自にin silico解析を行い、壁顆粒膜細胞と卵丘細胞のインタラクトーム解析を行うことにより、黄体化に向かう顆粒膜細胞に対する卵丘細胞の役割を明らかにする。
|
| Outline of Annual Research Achievements |
卵巣ではLHサージを契機に、卵胞内の顆粒膜細胞の黄体化（分化）によるプロゲステロン産生能の獲得、卵成熟、そして排卵という劇的な変化がおこる。研究代表者はRNA-seqを用いてLHサージ後の顆粒膜細胞におけるゲノムワイドな遺伝子発現を調べたところ、約9000もの遺伝子の発現が変化し、黄体化過程にある顆粒膜細胞の機能的変化に寄与することを見出した。この細胞機能の変化は非常に多様であるので、LH刺激の下流には様々なシグナルが存在し、そのシグナルは顆粒膜細胞自身のオートクライン作用によって誘導されるのみならず、近接する卵丘細胞のパラクライン作用によっても誘導されると考えた。本研究では、近年報告された卵巣シングルセルRNA-seqデータを用いて独自にin silico解析を行い、壁顆粒膜細胞と卵丘細胞のインタラクトーム解析を行うことにより、黄体化に向かう顆粒膜細胞に対する卵丘細胞の役割を明らかにすることを目的とした。インタラクトーム解析の結果、LHサージ後の卵胞内において、卵丘細胞から壁顆粒膜細胞へ作用するパスウェイを同定した。また、卵丘細胞から壁顆粒膜細胞への作用のみならず、壁顆粒膜細胞から卵丘細胞へ作用するパスウェイも同定された（Ephrins-Ephsパスウェイ、Wnt-Lrp6パスウェイ、TGFβ-TGFBRパスウェイ）。LHサージ後の卵胞内では、壁顆粒膜細胞と卵丘細胞が相互に作用し、ステロイド合成や卵子成熟に寄与していることが示唆された。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
卵巣シングルセルRNA-seqデータを用いたインタラクトーム解析によって、LHサージ後の壁顆粒膜細胞-卵丘細胞間におこる細胞間相互作用を同定し、それぞれのリガンド・レセプターのmRNA発現をreal time RT-qPCRによって確認できた。現在、研究代表者の海外研修のため補助事業期間を延長している。
|
| Strategy for Future Research Activity |
インタラクトーム解析により壁顆粒膜細胞-卵丘細胞間の相互作用が同定されたので、計画に沿って検証実験を進める。壁顆粒膜細胞・卵丘細胞の共培養系を用いて、壁顆粒膜細胞-卵丘細胞間におこる細胞間相互作用検証する。共培養した卵丘細胞と壁顆粒膜細胞を回収し、同定されたリガンドとレセプターのmRNA発現をreal time RT-qPCRで、タンパク発現をウエスタンブロットで確認する。また、共培養中の細胞培養液にリガンドの中和抗体を添加することでリガンドを不活化し、黄体化が促進あるいは阻害されるか検証する。
|
