| Project/Area Number |
23K24547
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| Project/Area Number (Other) |
22H03289 (2022-2023)
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Allocation Type | Multi-year Fund (2024)
Single-year Grants (2022-2023) |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 57060:Surgical dentistry-related
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| Research Institution | The University of Tokushima |
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Principal Investigator |
常松 貴明 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(歯学域), 准教授 (70726752)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
吉川 治孝 徳島大学, 先端酵素学研究所, 助教 (60709567)
北村 直也 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(歯学域), 教授 (70351921)
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| Project Period (FY) |
2024-04-01 – 2026-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2024)
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| Budget Amount *help |
¥17,550,000 (Direct Cost: ¥13,500,000、Indirect Cost: ¥4,050,000)
Fiscal Year 2025: ¥3,380,000 (Direct Cost: ¥2,600,000、Indirect Cost: ¥780,000)
Fiscal Year 2024: ¥3,380,000 (Direct Cost: ¥2,600,000、Indirect Cost: ¥780,000)
Fiscal Year 2023: ¥3,250,000 (Direct Cost: ¥2,500,000、Indirect Cost: ¥750,000)
Fiscal Year 2022: ¥7,540,000 (Direct Cost: ¥5,800,000、Indirect Cost: ¥1,740,000)
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| Keywords | HP陽性癌 / 脱ユビキチン化酵素 / HPV陽性癌 / HPV陽性がん / 頭頸部癌 / ユビキチン化 / HPV |
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| Outline of Research at the Start |
HPV陽性扁平上皮癌は子宮頸部では90% 以上、頭頸部癌では10% 程度を占める重要な扁平上皮癌の亜型である。近年、子宮頸癌ワクチンとしてHPV ワクチンが開発されたことで、欧米では発症率が大幅に減少したものの、本邦では副反応が問題になったことで、接種率が低いこと、また男性は接種しないことから依然として発生率の高い癌の一つである。そのため、特異的な分子標的治療法の開発は臨床上の重要な課題である。本研究では、申請者らが見出したHPVウイルスタンパク質であるE6、E7からなる新規タンパク質複合体の性状を最新の定量プロテオミクスを用いて解析し、HPV陽性扁平上皮癌の分子標的治療の分子基盤の確立を目指す。
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| Outline of Annual Research Achievements |
HPV陽性扁平上皮癌は子宮頸部では90% 以上、頭頸部癌では10% 程度を占める重要な扁平上皮癌の亜型である。近年、子宮頸癌ワクチンとしてHPV ワクチンが開発されたことで、欧米では発症率が大幅に減少したものの、本邦では副反応が問題となり、依然として発生率の高い癌の一つである。そのため、特異的な分子標的治療法の開発は臨床上の重要な課題である。 本研究では、研究代表者らが見出したHPVウイルスタンパク質であるE6、E7からなる新規タンパク質複合体の性状を最新の定量プロテオミクスを用いて解析し、HPV陽性扁平上皮癌の分子標的治療の分子基盤の確立を目指す。これまでに脱ユビキチン化酵素MPNDはE6やE7と結合し、複合体を形成することを見出しており、この新規複合体の相互作用タンパク質の同定を試みた。しかしながら有意な結果を得ることができなかった。問題点を解決するため、これまでに染色体上のMPND遺伝子座に3xFlagタグを挿入し、内在性のMPNDをFlag標識することに成功した。本年度は、このシステムを用いて内在性のMPND複合体を精製し、質量分析することで相互作用タンパク質の同定に取り組んだ。その結果、E6と相互作用する分子に加えて、E7と相互作用することが報告されている分子が含まれていた。E6と相互作用し、HPVによる発がんに寄与することが報告されている分子に関しては、免疫沈降法で実際にMPNDとの結合が確認され、MPNDのノックダウンによって機能が抑制されることを明らかにした。一方、E7と相互作用し、HPVによる発がんに寄与することが報告されている分子は分子量が非常に大きく、免疫沈降は困難と思われたため、下流の分子の活性化を検討したところ、MPNDのノックダウンによって活性化が抑制されることを明らかにした。これらの分子との相互作用はMPNDがHPVによる発がん過程に深く関与する可能性を示している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
口腔がん臨床サンプルにおけるMPNDの関連の解析に関しては、MPNDがDNA m6A修飾を認識するドメインを有することが報告されていることに加えて、これまでにHPV陰性、陽性がん細胞株でm6Aを定量したところ、HPV陽性がんで上昇することを新たに見出していたため、MPNDの代わりにm6Aの抗体を用いて臨床サンプルの解析や分子機構の解析を進める計画であったが、MPND複合体の機能解析を中心に進めたため、計画の遂行がやや遅れていると評価した。
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度以降は、本年度までに明らかとなったE6-MPND複合体、E7-MPND複合体の機能解析を相互作用分子を中心として、さらに進める計画である。
口腔がん臨床サンプルにおける解析に関しては、引き続き、MPNDの代わりにm6Aの抗体を用いて臨床サンプルの解析や分子機構の解析を進める計画であり、臨床検体とMPNDの関連を明らかにしたい。
次年度は最終年度であるため、研究内容をまとめ、国際雑誌に論文投稿する。
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