| Project/Area Number |
24K02615
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 57020:Oral pathobiological science-related
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
藤井 慎介 九州大学, 歯学研究院, 准教授 (60452786)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
清島 保 九州大学, 歯学研究院, 教授 (20264054)
自見 英治郎 九州大学, 歯学研究院, 教授 (40276598)
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| Project Period (FY) |
2024-04-01 – 2028-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2024)
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| Budget Amount *help |
¥18,590,000 (Direct Cost: ¥14,300,000、Indirect Cost: ¥4,290,000)
Fiscal Year 2027: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2026: ¥3,900,000 (Direct Cost: ¥3,000,000、Indirect Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 2025: ¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2024: ¥9,100,000 (Direct Cost: ¥7,000,000、Indirect Cost: ¥2,100,000)
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| Keywords | RANKL / 顎骨破壊 / 口腔腫瘍 / シグナル伝達 |
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| Outline of Research at the Start |
口腔腫瘍では、癌細胞が隣接組織の顎骨へ浸潤し、顎骨破壊をおこすことがある。癌細胞の顎骨浸潤度は手術法の選択だけでなく、その浸潤様式は生存率および無再発生存期間などの予後を規定する因子となる。したがって、顎骨浸潤を可及的低限度に留めることが生存率や予後の向上に繋がると考えられ る。このため、癌細胞の顎骨浸潤に不可欠な、破骨細胞を活性化する分子基盤を明らかにする必要がある。本研究では、口腔腫瘍細胞がRANKL（破骨細胞活性化 キーレギュレーター因子）発現を制御し破骨細胞を活性化する分子基盤を明らかにすることを目的とする。
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| Outline of Annual Research Achievements |
口腔腫瘍では、癌細胞が隣接組織の顎骨へ浸潤し、顎骨破壊をおこすことがある。癌細胞の顎骨浸潤度は手術法の選択だけでなく、その浸潤様式は生存率および無再発生存期間などの予後を規定する因子となる。したがって、顎骨浸潤を可及的低限度に留めることが生存率や予後の向上に繋がると考えられる。このため、癌細胞の顎骨浸潤に不可欠な、破骨細胞を活性化する分子基盤を明らかにする必要がある。本研究では、 口腔腫瘍細胞がRANKL(破骨細胞活性化キーレギュレーター因子)発現を制御し破骨細胞を活性化する分子基盤を明らかにすることを目的とする。
口腔腫瘍細胞培養上清依存的にマウス間質細胞株におけるRANKL発現量が上昇した。また、悪性腫瘍由来細胞株において、このRANKL発現量上昇は癌関連遺伝子の 低分子量Gタンパク質ARL4Cに依存していた。そこで、このARL4CをshRNAを用いて恒常的に発現抑制した細胞株由来の培養上清、コントール細胞株由来の培養上清にて刺激したマウス間質細胞株からmRNAを抽出し、RNA-sequence解析を行った。そ の結果、RANKLの発現制御に関わるシグナル伝達と転写因子を推定できた。また、Kari J. Kurppa博士と共同にて唾液腺悪性腫瘍の転移メカニズム、および原発 性骨内癌にて活性化しているシグナル伝達を明らかにした。またそのシグナル伝達阻害剤を用いるとRANKLの発現が減少した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
口腔腫瘍細胞(良性腫瘍由来細胞株および悪性腫瘍由来細胞株)の培養上清を回収し、マウス間質細胞株にその培養上清を添加し、RANKLの発現に与える影響について検討した。口腔腫瘍細胞培養上清依存的にマウス間質細胞株におけるRANKL発現量が上昇した。また、悪性腫瘍由来細胞株において、このRANKL発現量上昇 は癌関連遺伝子の低分子量Gタンパク質ARL4Cに依存していた。そこで、このARL4CをshRNAを用いて恒常的に発現抑制した細胞株由来の培養上清、コントール細胞 株由来の培養上清にて刺激したマウス間質細胞株からmRNAを抽出し、RNA-sequence解析を行った。
その結果、RANKL発現に関わるシグナル伝達とその転写因子を推定できた。このシグナル伝達阻害剤を用いるとRANKLの発現が減少したことから、その重要性が示唆された。加えて、病理組織標本を用いら免疫組織化学的検索にてこれらのシグナル伝達が活性化している所見を得たため、おおむね順調に進展していると考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
RNA-sequence解析の結果単離した候補因子(シグナル伝達と転写因子)のRANKL発現に与える影響についてsiRNAを用いて検討することを計画している。どの分子が口腔腫瘍から分泌され、間質細胞においてRNAKL発現に関わっているのか全容解明を目指す。加えて、ヒト病理組織標本を用いた免疫組織化学的手法にて検討を行う。破骨細胞実験系を用いて、これらのRNAKL上昇が破骨細胞の活性化に繋がるのかを検証する。
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