γ-グルタミントランスペプチダーゼのProcessing Proteaseの追求

Research Project

Project/Area Number	61580170
Research Category	Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	代謝生物化学
Research Institution	The University of Tokushima
Principal Investigator	松田佳子徳島大, 医学部, 助教授 (40035449)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	木戸博徳島大学, 医学部, 助手 (50144978)
Project Period (FY)	1986
Project Status	Completed (Fiscal Year 1986)
Budget Amount *help	¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000) Fiscal Year 1986: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000)
Keywords	刷子縁膜酵素 / γグルタミルトランスペプチダーゼ / プロセシング / プロセシングプロテアーゼ / 前駆体 / 細胞内移行
Research Abstract	腎臓近位尿細管刷子縁膜に結合しているγグルタミルトランスペプチダーゼは細胞内では単鎖の前駆体として合成され、糖鎖が結合したのち、細胞内移行して細胞膜上でプロセシングプロテアーゼによる切断をうけて活性なヘテロニ量体の成熟型酵素になることを明らかにしてきたが、61年度は分離刷子縁膜を用いて、前駆体からヘテロニ量体を生成するプロセシングプロテアーゼの性質を明らかにすることに集中した。 Sで標識した分離刷子縁膜を種々のプロテアーゼ阻害剤で処理したのちに37℃30分後に前駆体と成熟体の放射活性を測定することによりプロセシング活性をみると2mM EDTA,EGTA処理で約40%阻害がみられ、2mM phenylmethylsulfonylfluoride(PMSF)処理で約40%阻害が見られた。また2mM EDTAと2mM PMSFの存在ではプロセシング活性の90%が阻害された。一方、種々のプロテアーゼの合成ペプチド基質の効果を同じ系でみるとsuc-ala-pro-ala-MCAや、suc-gly-pro-phe-MCAはプロッセッシング活性を85%阻害し、Boc-val-pro-arg-MCA、Boc-leu-gly-arg-MCA、Ac-ala-ala-tyr-MCAでは30-45%阻害した。ところがBz-arg-MCAやBz-phe-val-arg-MCAでは5mM存在下でもプロセシングは全く阻害されなかった。これらの結果は前駆体のプロセシングに関与するプロテアーゼの基質特異性は極めて高いことをしめしている。さらにプロテアーゼの阻害剤パターンからセリンプロテアーゼまたは金属プロテアーゼが関与しているとおもわれる。また、プロセシングプロテアーゼは膜に結合していると考えられ、TritonX100などの界面活性剤により可溶化した場合は膜標品での活性に比べて30%のプロセッシング活性しか示さなかった。