がん抗原としのムチン型糖タンパク質の特性

Research Project

Project/Area Number	63015043
Research Category	Grant-in-Aid for Cancer Research
Allocation Type	Single-year Grants
Research Institution	Kyoto University
Principal Investigator	山科郁男京都大学, 薬学部, 教授 (70025675)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	菅原一幸京都大学, 薬学部, 助手 (60154449) 船越育雄京都大学, 薬学部, 助手 (10025702) 川嵜敏祐京都大学, 薬学部, 助教授 (50025706)
Project Period (FY)	1988
Project Status	Completed (Fiscal Year 1988)
Budget Amount *help	¥5,000,000 (Direct Cost: ¥5,000,000) Fiscal Year 1988: ¥5,000,000 (Direct Cost: ¥5,000,000)
Keywords	単クローン抗体 / ムチン糖鎖 / がん抗原 / Tn抗原 / ヒツジ顎下腺ムチン(OSM) / 結腸がん
Research Abstract	細胞の癌化に伴い細胞表面の糖鎖構造に異常をきたすことが知られている。癌化に伴う糖鎖異常を的確にとらえる単クローン抗体は癌の診断や治療などの臨床面で極めて有用である。本研究者らは特に糖蛋白質糖鎖に対する単クローン抗体の作成法を開発し、数多くの抗体を得た。今回ヌードマウスに担癌させたLS180を免疫原として新たに11種の単クローン抗体の作成に成功した。この中の1つ、MLS128はLS180のムチン型糖ペプチドと反応するが、血清型糖ペプチドや糖脂質とは反応しない。また本抗体は以前当研究室で作成した癌関連糖鎖抗原を認識する単クローン抗体MLS102と同様、羊顎下腺ムチン(OSM)と強く反応した。しかし、シアリダーゼにより、抗体結合性は影響をうけないことから本抗体はMLS102と異なるエピトープを認識していると考えられた。またα-N-アセチルガラクトサミニダーゼやプロナーゼによりOSMとの反応性が著しく低下することから本抗体のエピトープには糖とペプチドの両方が関与することが予想された。さらに詳細なエピトープの構造を知るためアシアロOSMから抗体と結合するフラグメントをMLS128-アフィニティカラムとHPLCを用いて単離した。本抗体と結合する最小のフラグメントはサーモリシン消化により単離されたGP-2で、そのアミノ酸配列は、Leu-X-Glu-X-X-X-Gln-Leu-Proと決定された。これは以前Hillらが報告したOSMのアポムチンのトリプシン消化物、Tlフラグメントの一部であった。Xの位置はSerまたはThrにGalNAcの残基がα結合していると考えられ、特に3箇所連続してGalNAc残基がペプチド鎖上に並ぶ構造がML S128との結合に重要な部分であることが推定された。Tn赤血球のグリコホリンAは本抗体と反応するが、そのN末付近には、GP-2と類似の構造が存在する。