ゲノム複製プログラム制御におけるゲノムアダプテーションの分子機構

• Project Area: Systematic study of chromosome adaptation
• Project/Area Number: 25125724
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Review Section: Biological Sciences
• Research Institution: Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science
• Principal Investigator: 正井 久雄 公益財団法人東京都医学総合研究所, ゲノム医科学研究分野, 基盤技術研究センター長 (40229349)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2015-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2014)
• Budget Amount: ¥11,700,000 (Direct Cost: ¥9,000,000、Indirect Cost: ¥2,700,000); Fiscal Year 2014: ¥5,850,000 (Direct Cost: ¥4,500,000、Indirect Cost: ¥1,350,000); Fiscal Year 2013: ¥5,850,000 (Direct Cost: ¥4,500,000、Indirect Cost: ¥1,350,000)
• Keywords: 複製プログラム / 複製起点 / 複製タイミング / Cdc7キナーゼ / チェックポイント / DNA損傷 / 栄養条件 / Rif1 / 染色体ドメイン / グルコース

Outline of Annual Research Achievements

１　出芽酵母を用いてDSB導入によりその近傍のdormant ori (休眠複製起点)が活性化されるメカニズムを検討する。1) DSB導入前と後でRif1およびKu複合体の結合部位は変動していなかった。しかし、DSB導入部位の近傍に強いRif1結合部位を同定した。2) ChIP-Seqにより、出芽酵母ゲノム全体におけるRif1の結合部位を決定した。
２　ゲノムワイドの複製プログラム制御に及ぼす因子の解析 1) cohesion, condensing, CTCFなどのknockdown が複製タイミングに及ぼす影響を調べた。しかし、顕著の影響は観察されなかった。同じ条件下でRif1KDは複製タイミングをゲノムワイドに大きく変化させる。
３　チェックポイントによる局所的複製プログラム制御機構 1)Mrc1はチェックポイント依存的と非依存的の二つの独立の経路で複製タイミングを制御することが明らかとなった。 2) チェックポイント非依存的な複製開始抑制経路はMrc1上のHBSドメインに依存する。ここにはHsk1キナーゼが結合し、Mrc1をリン酸化することによりそのconformationを変化させ、活性型に変化させる。HSBが欠損すると、Mrc1は常に活性化型になるためにHsk1をバイパスできると考えられる。
４　Rif1の染色体結合部位をChIP-Seqで解析するために免疫沈降可能な新規抗体を作製した。この抗体はChIPに使用可能であることが明らかになったので、マウスES細胞を用いて、まずRif1欠損により遺伝子発現が大きく変動する遺伝子領域の近傍にRif1が結合するかどうかをChIP-qPCRにより検討した。

Research Progress Status

26年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

26年度が最終年度であるため、記入しない。

Research Products

• [Journal Article] CDC28 phosphorylates Cac1p and regulates the association of Chromatin Assembly Factor I with chromatin. (2015)
  • Author(s): Jeffery, D., Kakusho, N., You, Z., Gharib, M., Wyse, B., Drury, E., Weinreich, M., Thibault, P. Verreault, A., Masai, H. and Yankulov, K.
  • Journal Title: Cell Cycle Volume: 14 Pages: 74-85
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Definition of the transcription factor TdIF1 consensus binding sequence through genome-wide mapping of its binding sites. (2015)
  • Author(s): Kotaro Koiwai, Takashi Kubota, Nobuhisa Watanabe, Katsutoshi Hori, Osamu Koiwai and Hisao Masai
  • Journal Title: Genes to Cells Volume: 20 Pages: 242-254
  • DOI: 10.1111/gtc.12216
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] NCOA4 Transcriptional Coactivator Inhibits Activation of DNA Replication Origins (2014)
  • Author(s): Bellelli, R., Castellone, M.D., Guida, T., Limongello, R., Dathan, N.A., Merolla, F., Cirafici, A.M., Affuso, A., Masai, H., Costanzo, V., Grieco, D., Fusco, A., Santoro, M., and Carlomagno, F.
  • Journal Title: Mol. Cell Jun Volume: 55 Pages: 123-137
  • DOI: 10.1016/j.molcel.2014.04.031
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Regulation and roles of Cdc7 kinase under replication stress. (2014)
  • Author(s): Yamada, M., Masai, H., and Bartek, J.
  • Journal Title: Cell Cycle Volume: 13 Pages: 1859-1866
  • DOI: 10.4161/cc.29251
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Cell cycle synchronization and flow cytometry analysis of mammalian cell (2014)
  • Author(s): Yoshizawa-Sugata, N. and Masai, H.
  • Journal Title: Methods in Molecular Biology Volume: 1170 Pages: 279-293
  • DOI: 10.1007/978-1-4939-0888-2_13
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] "ATM in prevention of genomic instability." (2014)
  • Author(s): Hisao Masai
  • Journal Title: Cell Cycle Volume: 13 Pages: 882-883
  • DOI: 10.4161/cc.28216
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] "Temporal and spatial regulation of eukaryotic DNA replication: From regulated initiation to genome-scale timing program." (2014)
  • Author(s): Renard-Guillet, C., Kanoh, Y., Shirahige, K., and Masai, H.
  • Journal Title: Seminars in Cell & Developmental Biology Volume: 30 Pages: 110-120
  • DOI: 10.1016/j.semcdb.2014.04.014
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Inhibition of DNA damage-induced apoptosis through Cdc7-mediated stabilization of Tob (2013)
  • Author(s): Yamada, M., Watanabe, K., Mistrik, M., Mailand, N., Lee, M-H., Masai, H., Lukas, J. and Bartek, B.
  • Journal Title: J. Biol. Chem Volume: 27 Pages: 2459-2472
  • DOI: 10.1101/gad.224568.113
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] "The Human Tim/Tipin Complex Directly Interacts with DNA Polymerase {epsilon} and Stimulates its Synthetic Activity." (2013)
  • Author(s): Aria, V., De Felice, M., Di Perna, R., Uno, S., Masai, H., Syvaoja, J.E., van Loon, B., Hubscher, U. and Pisani, F.M.
  • Journal Title: J. Biol. Chem Volume: 288 Pages: 12742-12752
  • DOI: 10.1074/jbc.m112.398073
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] "Analysis of epigenetic stability and conversions in Saccharomyces cerevisiae reveals a novel role of CAF-I in position-effect variegation." (2013)
  • Author(s): Jeffery, D.C., Wyse, B.A., Rehman, M.A., Brown, G.W., You, Z., Oshidari, R., Masai, H. and Yankulov, K.Y.
  • Journal Title: Nucleic Acids Res Volume: 41 Pages: 8475-8488
  • DOI: 10.1093/nar/gkt623
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Mechanism of transition to invasive cancer, on basis of genomic instability and genetic alterations, and identification of a novel biomarker to predict poor prognosis in endometrial carcinomas (2013)
  • Author(s): Tanikawa, M., Wada-Hiraike, O., Yoshizawa-Sugata, N., Shirane A, Hirano M, Hiraike H, Miyamoto, Y., Sone, K., Ikeda, Y., Kashiyama, T., Oda K, Kawana K, Katakura Y, Yano T, Masai, H., Roy AL, Osuga, Y. and Fujii, T.
  • Journal Title: Br. J. Cancer Volume: 109 Pages: 2388-2401
  • DOI: 10.1038/bjc.2013.532
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Replication timing regulation of eukaryotic replicons: Rif1 as a global regulator of replication timing (2013)
  • Author(s): Yamazaki, S. Hayano, M. and Masai, H.
  • Journal Title: Trends in Genetics. Volume: 29 Pages: 449-460
  • DOI: 10.1016/j.tig.2013.05.001
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] "A personal reflection on the Replicon Theory: from R1 plasmid to replication timing regulation in human cells" (2013)
  • Author(s): Masai, H.
  • Journal Title: J. Mol. Biol Volume: 425 Pages: 4663-4672
  • DOI: 10.1016/j.jmb.2013.03.039
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] "Regulation of chromosome dynamics by Hsk1 kinase." (2013)
  • Author(s): Matsumoto, S. and Masai, H.
  • Journal Title: Biochem. Soc. Trans. Volume: 41 Pages: 1712-1719
  • DOI: 10.1042/bst20130217
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Presentation] Conserved mechanisms and diversity of genome DNA replication: from bacteria to human (2014)
  • Author(s): 正井 久雄
  • Organizer: 第37回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜（神奈川）
  • Year and Date: 2014-11-25 – 2014-11-27
  • Invited
• [Presentation] Regulation of mammalian Mcm helicase complexes (2014)
  • Author(s): Hisao Masai, You Zhiying, Koji L. Ode, Naoko Kakusho, Rino Fukatsu, and Haruhiko Takisawa
  • Organizer: 第87回日本生化学会大会シンポジウム「ゲノムを支えるDNAヘリカーゼの動態を探求する新たな研究展開」
  • Place of Presentation: 国立京都国際会館（京都）
  • Year and Date: 2014-10-15 – 2014-10-18
  • Invited
• [Presentation] 染色体DNA複製プログラムの制御機構 (2014)
  • Author(s): 正井 久雄
  • Organizer: 大阪大学蛋白質研究所セミナー「染色体伝承の分子背景：複製から染色体分離まで」
  • Place of Presentation: 大阪大学（大阪）
  • Year and Date: 2014-09-25 – 2014-09-26
  • Invited
• [Presentation] Regulation of DNA replication program in fission yeast and human cells (2014)
  • Author(s): Hisao Masai
  • Organizer: Marco Foiani（Italy, Milan）教授の招聘により IFOM Foundation – F.I.R.C. Institute of Molecular Oncology Foundationで講演
  • Place of Presentation: Italia, Milan
  • Year and Date: 2014-09-16
  • Invited
• [Presentation] Mrc1/Claspinの分子内相互作用による活性制御および新規機能 (2014)
  • Author(s): 正井 久雄
  • Organizer: 九州大学 大学院薬学研究院 招聘研究セミナー
  • Place of Presentation: 九州大学 （福岡）
  • Year and Date: 2014-08-29
  • Invited
• [Presentation] Regulation of replication program in fission yeast and human cells (2014)
  • Author(s): Hisao Masai
  • Organizer: Peking University（特別招聘講演）
  • Place of Presentation: Peking University（中国）
  • Year and Date: 2014-05-16
  • Invited
• [Presentation] 染色体DNA複製プログラムの制御機構と起源・進化 (2014)
  • Author(s): 正井 久雄、田中 卓、加納 豊、山崎 聡志、松本 清治、吉沢 直子、松嶋 夢叶
  • Organizer: 第２回 細胞周期制御と細胞運命 シンポジウム
  • Place of Presentation: 浜松（静岡）
  • Year and Date: 2014-02-13 – 2014-02-14
  • Invited
• [Presentation] イントロダクション (2013)
  • Author(s): 正井 久雄
  • Organizer: 第36回（2013年）日本分子生物学会年会，ワークショップ 『レプリコン仮説50周年：染色体複製装置の形成とその活性の時空間制御』
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド（兵庫）
  • Year and Date: 2013-12-03 – 2013-12-06
  • Invited
• [Presentation] Rif1: a potential global regulator of DNA replication, DNA repair, and recombination (2013)
  • Author(s): 正井 久雄、山崎 聡志、Lai Mongsing、Foiani Marco、吉沢 直子、加納 豊、松本 清治、森山賢治、覺正 直子、深津 理乃、松嶋 夢叶、河野 暢明、Renard-Guillet Claire
  • Organizer: 第36回（2013年）日本分子生物学会年会，ワークショップ 『DNA二重鎖切断のend-resectionと修復機構の選択・制御』
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド（兵庫）
  • Year and Date: 2013-12-03 – 2013-12-06
  • Invited
• [Presentation] Introduction" Symposium, (2013)
  • Author(s): Hisao Masai
  • Organizer: 86th Annual Meeting of the Japanese Biochemical Society
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜（神奈川）
  • Year and Date: 2013-09-11 – 2013-09-13
  • Invited
• [Presentation] Chromatin architecture that regulates replication timing of eukaryotic chromosomes (2013)
  • Author(s): Hisao Masai, Yutaka Kanoh, Satoshi Yamazaki, Motoshi Hayano, Naoko Yoshizawa, Kenji Moriyama, Yumeka Matsushima, Naoko Kakusho, Rino Fukatsu
  • Organizer: 第86回日本生化学会大会事務局 インターナショナルセッション『Assembly and architecture of protein complexes regulating inheritance and stable maintenance of genome』
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜（神奈川）
  • Year and Date: 2013-09-11 – 2013-09-13
  • Invited
• [Presentation] Control of origin firing timing in fission yeast cells (2013)
  • Author(s): Hisao Masai
  • Organizer: EMBO Conference "Pombe 2013: 7th International Fission Yeast Meeting
  • Place of Presentation: London UK
  • Year and Date: 2013-06-24 – 2013-06-29
  • Invited
• [Book] DNA Replication, Recombination and Repair: Molecular Mechanisms and Pathology (2015)
  • Author(s): Motoshi Hayano, Seiji Matsumoto and Hisao Masai
  • Publisher: Springer