| 研究課題/領域番号 |
01400001
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| 研究種目 |
一般研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
広領域
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| 研究機関 | 筑波大学 |
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研究代表者 |
藤伊 正 筑波大学, 生物科学系, 教授 (20011611)
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| 研究分担者 |
原 諭吉 東京医科歯科大, 医学部, 助教授 (00092429)
佐藤 忍 筑波大学, 生物科学系, 講師 (70196236)
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| 研究期間 (年度) |
1989 – 1990
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| 研究課題ステータス |
完了 (1990年度)
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| 配分額 *注記 |
16,600千円 (直接経費: 16,600千円)
1990年度: 7,000千円 (直接経費: 7,000千円)
1989年度: 9,600千円 (直接経費: 9,600千円)
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| キーワード | 耐塩性 / Na^+ーATPase / PCR法 / ラフィド藻 / イオン輸送 / Heterosigma akashiwo / Na^<++>-activated ATPase / PCR(ポリメラ-ゼ・チェィン・リアクション) / cDNA |
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| 研究概要 |
われわれは赤潮構成藻Heterosigma akashiwoの細胞膜上に動物のNa^+ーK^+ーATPaseの抗体と反応するNa^+ーactivated ATPaseの存在を植物で初めて確認した。この遺伝子を高等植物に導入し、耐塩性植物を作出する事を目的としてその遺伝子の単離を試みた。高等動物Na^+ーK^+ーATPaseに対する抗体や高等動物 Na^+ーK^+ーATPaseのcDNAをプロ-ブとしてアカシオ藻から得たcDNAライブラリ-をクリ-ニングしたが、クロ-ンを得ることはできなかった。真核生物のATPaseに存在する2つの保存配列(P siteとAB site)をもとに合成したオリゴDNAをプライマ-としてPCR法によりアカシオcDNAからATPase遺伝子の一部を増幅させ、そのDNAをプロ-ブとして2種のATPase cDNAを得ることができた。現在、それらの完全シ-クエンシングを行っている。これらの分子はATPaseに特徴的な2次構造を示し、ATPase分子のcDNAである可能性が強く示唆された。得られたクロ-ンが、実際にNaイオンを輸送し得るかどうかを検討するために、この遺伝子をin vitroで転写を行えるプラスミドに組み込み、合成されたmRNAをアフリカツメガエルの卵細胞へ注入する計画を建て、現在準備中である。また、高等植物に得られた遺伝子を導入するに先立ち、動物Na^+ーK^+ーATPaseのα、β subunitsの遺伝子のそれぞれをタバコ培養細胞に導入する系を作成し、現在それぞれの再分化個体を得るところまで進んでいる。
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