| 研究課題/領域番号 |
01440030
|
|---|
| 研究種目 |
一般研究(A)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究分野 |
人体病理学
|
|---|
| 研究機関 | 福井医科大学 |
|---|
研究代表者 |
福田 優 福井医科大学, 医学部, 教授 (60079720)
|
|---|
| 研究分担者 |
法木 左近 福井医科大学, 医学部, 助手 (30228374)
三好 憲雄 福井医科大学, 医学部, 助手 (40209961)
杉原 洋行 福井医科大学, 医学部, 助手 (30171169)
中西 和夫 福井医科大学, 医学部, 助教授 (10094434)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1989 – 1991
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1991年度)
|
| 配分額 *注記 |
3,000千円 (直接経費: 3,000千円)
1991年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1990年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
|
|---|
| キーワード | 癌マ-カ- / DNA不安定性 / AO蛍光分染 / 抗単鎖DNA抗体 / STA結合糖蛋白cDNA / 抗STA結合糖蛋白質抗体 / 活性酸素 / 癌診断 / AO蛍光染色 / STA結合糖蛋白質cDNA / STA結合糖蛋白質 / in situ hybridization / Photon counting / 悪性腫瘍マ-カ- / DNA損傷 / アクリジンオレンジ / 糖蛋白 / モノクロ-ナル抗体 / ケミルミ |
|---|
| 研究概要 |
本研究の目的は通常の病理パラフィン切片上で特異的に癌細胞を固定して日常の癌診断の有力な補助手段とする新しい方法を開発一般化することであり、(1)癌細胞核DNAの不安定性(2)癌細胞特異性STA結合糖蛋白、及び(3)癌細胞から放出される活性酸素をマ-カ-として用いた。I癌細胞核DNAの不安定をマ-カ-とする病理切片標本上での癌細胞分染法の開発、1)Acridine Orange(AO)による癌細胞の蛍光分染法、人癌の生検(200例)、手術(50例)、培養(5例)癌細胞について塗抹標本、凍結切片標本、パラフィン切片標本を作製して固定条件及び単鎖化前処理条件の至適条件を検討した結果、(a)未固定細胞の塗抹標本ではエタノ-ル:アセトン(1:1V/V)4℃16〜24時間固定RNase37℃1時間処理後2NHCl30℃8〜9分の加水分解条件が至適で美しい癌細胞の分染が得られた。(b)凍結切片、パラフィン切片では2NHCl30℃2〜5分の加水分解が至適であったが分染不十分であった。2)抗単鎖DNA抗シチジン抗体による癌細胞核の免疫分染法150例の生検20例の手術癌組識を用いて通常の病理パラフィン切片を作製して検討した結果(a)10%衝ホルマリン4℃24時固定RNase処理2NHCl30℃15分の加水分解が至適で免疫染色による明瞭な分染が全例において達成された。正常細胞の一部に切片作製過程の人工単鎖化による偽陽性がみられたが明瞭に識別された。II癌特異的STA結合蛋白質をマ-カ-とする癌細胞の分染法、1)人甲状線癌のcDNAライブラリ-をλgtに組み込み大陽菌に導入してSTA結合糖蛋白を合成するプラ-クからそのcDNAを得るとともにSTA陽性変異大腸菌でマウスを免疫して抗体を得た。それらを用いてin situ hybrldization、免疫染色で人癌の分染に成功した。III癌細胞の活性酸素の放出をMCLAを浸み込ませたセルロ-スアセテ-ト膜上で高感度フィルム及びphoton counting imaging systemを用いて検出することができた。
|
