| 研究概要 |
1)生化学的解析:酵母菌における蛋白質の細胞内輸送のin vitro系を確立することが出来た。即ち透過性酵母細胞を用いた系でアメリカでは既に確立されていたが,本研究により完全に再現性よく動くようになった。酵母菌を液体窒素上で凍結融解することにより透過性酵母細胞(Pーcell)を得た。別個に酵母の性フエロモンであるαーファクタ-の遺伝子をSP6プロモ-タ-下においてin vitroでαーファクタ-前駆体mRNAを合成させ,酵母の無細胞抽出液と ^<35>SーMetを用いて放射性のαーファクタ-前駆体を調製し更にゲル瀘過して精製した。この標識αーファクタ-前駆体とPーcellとを一緒に温置すると,αーファクタ-前駆体は粗面小胞体内に分泌された。即ちPーcellの外から加えたプロテア-ゼによっても小胞体内のαーファクタ-前駆体は分解されないこと,またコア糖鎖がついて分子量が大きくなっていることが確められた。更に条件を整えた結果,αーファクタ-前駆体はコア糖鎖付加型により更に分子量の大きい分子種が見出され,これらはαーファクタ-抗体と反応しConAとも結合することからゴルジ型糖鎖をもつと考えられ,小胞体からゴルジ装置への輸送が確認された。そこでこのin vitroの蛋白質輸送系において,我々が既に明かにしている<uso1>___ー変異の影響をしらべた。この変異は37℃では小胞体からゴルジへの輸送が止まるものであるが,in vitroの系ではこれが再現されなかった。
2)阻害剤を用いた解析:酵母Candida albicansは抗生物質ブレフェルデインAに感受性で,分泌性かつ細胞表在性の酸性ホスファタ-ゼの分泌が顕著に抑制される。この現象を解析した結果,ブレフェルディンAは分泌蛋白質である酸性ホスファタ-ゼの細胞内輸送を,粗面小胞体からゴルジ装置への間でブロックしていることを明らかにした。上記in vitroの系でしらべたところ,輸送阻害は起こらなかった。
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