• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 前のページに戻る

放線菌の生産するコレステロ-ル転換酵素系の遺伝生化学的究明とその応用

研究課題

研究課題/領域番号 01480036
研究種目

一般研究(B)

配分区分補助金
研究分野 発酵工学
研究機関広島大学

研究代表者

室岡 義勝  広島大学, 工学部, 教授 (60029882)

研究分担者 山下 光雄  広島大学, 工学部, 助手 (40220347)
小埜 和久  広島大学, 工学部, 助教授 (10144883)
研究期間 (年度) 1989 – 1990
研究課題ステータス 完了 (1990年度)
配分額 *注記
5,300千円 (直接経費: 5,300千円)
1990年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1989年度: 4,300千円 (直接経費: 4,300千円)
キーワード放線菌 / コレステロ-ル転換酵素系 / シトクロ-ムP450 / 遺伝生化学 / 形質転換 / コレステロ-ル酸化酵素 / コレステロ-ル転換系 / Pー450
研究概要

コレステロ-ルは、動物体重の2%を占める代表的ステロ-ルで、各種ホルモンの前駆体となる重要な脂質である。コレステロ-ルの臨床検査には、もっぱらコレステロ-ル酸化酵素を用いた方法が使用されている。本研究は、放線菌の生産するコレステロ-ル酸化酵素遺伝子の放線菌内へのクロ-ニングと、放線菌宿主ーベクタ-系を用いた酵素生産性の向上研究に始まり、遺伝子の構造解析による、いくつかの興味ある発見と、将来への可能性を持った展望の基に、計画実施された。
本研究過程において、放線菌のコレステロ-ル酸化酵素の全遺伝子配列を決定した。成熟タンパク質は、504コのアミノ酸をコ-ドし、分子量54、913と推定された。コンピュ-タ-グラフィクにより、FAD結合サイトヤ、コレステロ-ル結合サイト等、を解析した。本酵素遺伝子の上流に、チトクロ-ムP450類似遺伝子の存在を発見した。チトクロ-ムP450は、コレステロ-ルの胆汁酸への異化初期反応に関与するほか、ステロイドの水酸化等の多種多様なオキシダ-ゼ反応を触媒することが知られている。この遺伝子とコレステロ-ル酸化酵素遺伝子が、オペロンを形成していること、および少なくとも3つの転写産物がある事を証明した。
さらに、コレステロ-ル転換系の一連の遺伝子を、guided genomic walking法を独自に開発し、約30kbのDNAをクロ-ニングした。さらに、上記クロ-ン化遺伝子を利用して、コレステロ-ル酸化酵素を大量に分泌発現させる事に成功した。この事により、下の生産菌より70倍の生産性の向上を見た。

報告書

(3件)
  • 1990 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1989 実績報告書
  • 研究成果

    (26件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (26件)

  • [文献書誌] Tomoyuki Ishizaki: "Nucleotide sequence of the gene for cholesterol oxidase from a Streptomyces sp." Jouranl of Bacteriology. 171. 596-601 (1989)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yoshikatsu Murooka: "A new operon involved in a sterol metabolism in Streptomyces sp." Actinomycetology. 3. 89-94 (1989)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Masami Horii: "An operon containing the gene for cholesterol oxidase and a cytochrome Pー450ーlike protein from a Streptomyces sp." Jouranal of Bacteriology. 172. 3644-3653 (1990)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Istvan Molnar: "“Guided genomic walking",a systematic approach to cloning intermediateーsized restriction fragments extending outside the boundaries of known sequences"

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Istvan Molanr: "Secretory overproduction of the Streptomyces cholesterol oxidase by Streptomyces lividans with a recombinant multiーcopy vector"

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yoshikatsu Murooka: "Biotechnology Advances (分担執筆)" Pergamon Press Plc.,Oxford,UK, 29 (1990)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yoshikatsu Murooka: "Fermentation Technologies: Industrial Applications (分担執筆)" Elsvier Applied Sciences,London,UK, 6 (1990)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Tomoyuki, Ishizaki et al.: "Nucleotide sequence of the gene for cholesterol oxidase from a Streptomyces sp." J. Bacteriol.171. 596-601 (1989)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yoshikatsu, Murooka et al.: "A new operon in a sterol metabolism in Streptomyces sp." Actinomycetology. 3. 89-94 (1989)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Masami, Horii et al.: "An operon containing the gene for cholesterol oxidase and a cytochorome P-45-like protein from a Streptomyces sp." J. Bacteriol.172. 3644-3653 (1990)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Istvan Molnar et al.: ""Guided genomic walking", a systematic approach to cloning intermediate-sized restriction fragments extending outside the boundaryies of known sequences"

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Istvan, Molnar et al.: "Secretory overproduction of the Streptomyces cholesterol oxidase by Streptomyces lividans with a recombinant multi-copy vector"

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yoshikatsu, Murooka: "Biotechnology Advances" Pergamon Press Plc., Oxford, UK. Vol8. 29-57 (1990)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yoshikatsu, Murooka: "Fermentation Technologies : Industrial Applications" Elsvier Applied Science, London, Uk.40-45 (1990)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Tomoyuki Ishizaki: "Nucleotide sequence of the gene for cholesterol oxidase from a streptomyces sp." Jouranal of Bacteriology. 171. 596-601 (1989)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Yoshikatsu Murooka: "A new operon involved in a sterol metabolism in Streptomyces sp." Actinomycetology. 3. 89-94 (1989)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Masami Horii: "An operon containing the gene for cholesterol oxidase and a cytochrome Pー450ーlike protein from a Streptomyces sp." Jouranal of Bacteriology. 172. 3644-3653 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Istv^^'an Moln^^'ar: "“Guided genomic walking",a systematic approach to cloning intermediateーsized restriction fragments extending outside the boundaries of known sequences"

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Istv^^'an Molna^^'ar: "Secretory overproduction of the Streptomyces cholesterol oxidase by Streptomyces lividans with a recombinant multiーcopy vector"

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Yoshikatsu Murooka: "Biotechnology Advances 分担執筆" Pergamon Press Plc.,Oxford,UK, 29 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Yoshikatsu Murooka: "Fermentation Technologies:Industrial Applications 分担執筆" Elsvier Applied Sciences,London,UK, 6 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Ishizaki,T.,N.Hirayama,H.Shinkawa,O.Nimi and Y.Murooka: "Nucleotide sequence of the gene for cholesterol oxidase from Streptomyces sp." Journal of Bacteriology. 171. 596-601 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Horii,M.,T.Ishizaki S-Y.Paik,T.Manome and Y.Murooka: "An Operon containing the genes for cholesterol oxidase and a cytochrome P-450-like protein from Streptomyces sp." Journal of Bacteriology. submitted.

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Murooka,Y.,T.Ishizaki,M.Horii and S-Y.Paik: "A new operon involved in a sterol metabolism in Streptomyces sp." Actinomycetologia. 3. 89-94 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Murooka,Y.(ed.Spiechck): "Genetic desighns for product formation in recombinant microbes/in Biotechnology Advances" Pergamon Press plc,Oxford,England, 30 (1990)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Murooka,Y.(ed.P-L.Yu): "Secretory over-production of microbial enzymes using new host-vector systems/in Fermentation Technology;Industrial Applications" Elsevier Scientific Publishers Ltd, 6 (1990)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書

URL: 

公開日: 1989-04-01   更新日: 2016-04-21  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi