• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 前のページに戻る

標的遺伝子の選択的不活性化機能をもつアンチセンスDNAの設計と合成

研究課題

研究課題/領域番号 01540451
研究種目

一般研究(C)

配分区分補助金
研究分野 天然物有機化学
研究機関東京工業大学

研究代表者

関根 光雄  東京工業大学, 理学部生命理学科, 助教授 (40111679)

研究期間 (年度) 1989
研究課題ステータス 完了 (1989年度)
配分額 *注記
1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
1989年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
キーワードアンチセンスDNA / メチル化 / 保護基 / カルバモイルホスホネ-ト / 機能性DNA
研究概要

アンチセンスDNAの化学合成に必要な新しい基礎反応を確立するため、まず5'および3'末端にメチル基を導入する反応を検討した。このメチル化反応は設計合成したアンチセンスDNAが標的DNA分子と結合し二重鎖DNAとなったとき、混在するDNA分解酵素から分解をうけないように5'および3'末端のヌクレオシドの糖水酸基をO-メチル化するものである。糖水酸基を選択的にO-メチル化するため、末端のヌクレオシドとしてチミジンを選び、これを一旦1,3-ベンゾジチオリリウムテトラフルオロボレ-トでピリジン中反応させ5'糖水酸基に1,3-ベンゾジチオ-ル-2-イル(BDT)基を導入し、つづけてラネ-ニッケルで還元し5'-O-トリチルチミジンを得た。3'-O-メチルチミジンの合成も5'-O-トリチルチミジンを同様な方法で反応させたのち脱トリチル化して得ることができた。アンチセンスDNAのオリゴタクレオチド部位の合成はフェニルチオ基をインタ-ヌクレオチド結合のリン酸基の保護基として活用し、上述した5'-O-メチルチミジンと3'-O-メチルチミジンをそれぞれ5'および3'末端ヌクレオシドとして組み込みトリの肉腫ウイルスSar遺伝子に相補的な18量体の保護体を合成した。最終的にすべての保護基を除去しアンチセンスDNA18量体を得た。次に、このアンチセンスDNAに機能性を付与するため、すなわち細胞膜透過性を向上させるため、リン酸基のかわりにエトキンカルボニルホスホニル基に置換したDNAオリゴマ-の合成を検討した。その結果、エトキシカルボニル基を最終的にアンモニア処理でカルバモイルホスホネ-ト基に変換する際一部DNA鎖が切断されてしまうことがわかった。そこで、DNA鎖切断の副反応を防止する目的で種々の一級アミンを用いてN-アルキルカルバモイルホスホネ-ト基に変換しその安定性について現在検討中である。

報告書

(1件)
  • 1989 実績報告書
  • 研究成果

    (6件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (6件)

  • [文献書誌] H.HOTODA et al.: "Preactivation Strategy for Oligodeoxyribonucleotide Synthesis Using Triaryloxydichlorophosphoranes in the Phosphotriester Method" Nucleic Acids Res.17. 5291-5305 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] J.MATSUZAKI et al.: "Bis(2,4,6-tribromophenyl)phosphorochloridate:A New Type of Condensing Reagent in Oligonucleotide Synthesis" Nucleosides & Nucleotides. 8. 367-382 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] T.WADA et al.: "O-Alkyl O-Nucleoside 3'-Phosphonates as Novel Starting Materials for Oligonucleotide Synthesis" Nucleic Acids Res.,Symposium Series. 21. 27-28 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] M.Sekine et al.: "General Method for the Preparation of N^3- and O^4-Substituted Uridine Derivatives by Phase-Transfer Reactions" J.Org.Chem.54. 2321-2326 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Mitsuo SEKINE et al.: "Facile Synthesis of 3'-O-Methylthymidine and 3'-Deoxythymidine and Related Deoxygenated Thymidine Derivative:A New Method for Selective Deoxygenation of Secondary Hydroxyl Groups" J.Org.Chem.55. 924-928 (1990)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Mitsuo SEKINE et al.: "2-Methylthio)phenylthiomethyl(MPTM):A New Protecting Group of Hydroxyl Groups Capable of Conversion to a Methyl Group" J.Org.Chem.54. 5998-6000 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書

URL: 

公開日: 1989-04-01   更新日: 2016-04-21  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi