| 研究課題/領域番号 |
01560096
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
応用生物化学・栄養化学
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| 研究機関 | 神戸大学 |
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研究代表者 |
山形 裕士 神戸大学, 農学部, 助教授 (00159203)
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| 研究期間 (年度) |
1989 – 1990
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| 研究課題ステータス |
完了 (1990年度)
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| 配分額 *注記 |
1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
1990年度: 300千円 (直接経費: 300千円)
1989年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
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| キーワード | メロン / セリンプロテア-ゼ / 果実酵素 / タンパク質生合成 / cDNAクロ-ニング |
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| 研究概要 |
メロンセリンプロテア-ゼ(MSP)はメロン果実の主要タンパク質である。MSPはメロンの受粉後果実の生長初期に果実でのみ発現するが、その遺伝子発現とタンパク質の合成機構を分子レベルで解明することを目的として以下の研究を行った。若い果実のtissue blotting分析、及び組織の一部を標識アミノ酸で標識し、合成されたタンパク質を解析した結果、本酵素は種子を包む袋状組織かそれに接した周囲の組織で合成されることが示唆された。
一方、メロン果実よりグアニジンチオシアン酸とCsClを用いる超遠心分離法によりin vitroタンパク質合成系で高い鋳型活性を持つmRNAを単離した。果実の種々の組織のmRNAの翻訳産物に相違を認めた。次に果芯部のmRNAよりcDNAを合成し、これをλgtllのEco RI部位に組み込み、in vitro packaging後、大腸菌Y1090 R^ーに導入し、cDNAライブラリ-を作成した。このライブラリ-について抗ーMSP・ウサギ抗体を用いて免疫スクリ-ニングした結果、6個の陽性クロ-ンを得た。これらの内、5個のクロ-ンの持つcDNAの長さを測定した結果、700ー1,900bpであり、最も長いλMSP 28はMSPの全長cDNAに近い長さを有していた。これら5種類のcDNAをファ-ジミドpBluescriptにサブクロ-ニングして、現在その塩基配列を決定中である。
一方、若いメロンの葉よりCTAB法でDNAを抽出し、Sau 3Aで部分分解して10ー20 kb長のDNAを調製した。これをEMBL 3のBam HI部位に組み込んで大腸菌に導入し、遺伝子ライブラリ-を作成した。今後は続けてcDNAの構造決定と共に、単離したcDNAをプロ-ブとしてMSPの遺伝子をクロ-ニングし、その構造解析を行い、MSPの果実特異的発現に関与する配列を明らかにする計画である。
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