| 研究課題/領域番号 |
01570043
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
生理学一般
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
黒田 英世 名古屋大学, 理学部, 助教授 (50064845)
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| 研究分担者 |
曽我部 正博 名古屋大学, 医学部, 助教授 (10093428)
佐藤 英美 名古屋大学, 理学部, 教授 (40109260)
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| 研究期間 (年度) |
1989 – 1990
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| 研究課題ステータス |
完了 (1990年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1990年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1989年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
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| キーワード | イノシトール三りん酸 / イノシトール三りん酸受容体 / カルシウム遊離 / カルシウムチャネル / ウニ卵 / 受精 / イノシト-ルミりん酸 / イノシト-ル三りん酸 |
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| 研究概要 |
本研究は以下の三部よりなる。即ち1・イノシトール三燐酸(IP_3)によるウニ卵ミクロソウム分画(MF)からのカルシウム遊離、2・MF膜に存在するイオンチャネルの検索、及び3・イノシトール三燐酸受容体(IP_3r)の精製。
1・IP_3によるウニ卵MFからのカルシウム遊離。
MFはATP添加によりCa^<2+>を取り込み、IP_3により一過性に遊離する。この遊離は1mg/mlのheparinにより完全に阻害される。またTMB-8も同様な効果を持つ。このIP_3によるCa遊離とは独立にカフェインによるCa遊離機構がある事を見いだした。これはルテニウムレッドにより阻害される。
2・MF膜に存在するイオンチャネルの検索。
MFを脂質平面膜に融合させ単一イオンチャネル電流を測定する方法を用いた。その結果K^+・Ca^<2+>及びC1^-チャネルを各々数種記録した。その内最も高頻度に観察されたのは約30pSのコンダクタンスを持つK^+チャネルであった。残念ながらIP_3により活性化されるCa^<2+>チャネルは記録されなかった。これはMF膜に於けるこの様なチャネルの密度が非常に低いか、又は平面膜に組み込まれたときこれがrun downしやすい事による可能性がある。
3・IP_3rの精製。
上記(1)の如くMF膜には確かにIP_3rが存在すると考えられるが、(2)の様にMFを平面膜に融合するとその活性は消失してしまう。そこでIP_3rの存在を立証しその性質を調べる別のアプローチとして生化学的にIP_3rの精製を試みた。その結果分子量約200kDでIP_3と特異的に結合するのタンパク質を得た。チャネルとしての性質は現在追求している。
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