| 研究課題/領域番号 |
01570062
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
神経・筋肉生理学
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
高井 章 名古屋大学, 医学部, 助教授 (50126869)
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| 研究分担者 |
中山 晋介 名古屋大学, 医学部, 助手 (30192230)
徳納 博幸 名古屋大学, 医学部, 助手 (60155520)
富田 忠雄 名古屋大学, 医学部, 教授 (50078763)
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| 研究期間 (年度) |
1989 – 1990
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| 研究課題ステータス |
完了 (1990年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1990年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
1989年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
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| キーワード | オカダ酸 / プロテインホスファタ-ゼ / 蛋白質燐酸化 / 平滑筋 / イオンチャネル / pーニトロフェニル燐酸 / pーニトロフェニン燐酸 / 蛋白質、燐酸化 / 気管枝喘息 / イソプレナリン / カルシウム依存性カリウムチャネル / パッチクランプ方 |
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| 研究概要 |
本研究では、特異的プロテインフォスファスタ-ゼ(PrPase)阻害剤である、海綿毒素オカダ酢(OA)を用いて、哺乳動物平滑筋組織におけるPrPaseの組成と生理的役割とについて検討し、次のような成果を得た。
1.OAが、各種PrPaseに対し著しく異つた阻害活性を示すことを利用して、数種の平滑筋組織におけるPrPase組成を調べた。I型PrPaseの内因性阻害因子であるインヒビタ-2(Iー2)も併用した。その結果、平滑筋が次の四種類のPrPase活性を含むことが判明した:OAとIー2のどちらにも抑制されるI型、どちらにも影響を受けない2C型、およびIー2には阻害されないがOAには異る濃度範囲で抑制される二種の2A型様活性。skinned fibreにおける実験から、二つの2A型活性のうちOA感受性の比較的低いほうのものが、筋弛緩に関与している可能性が示唆された。
2.イソプレナリンの気管枝拡張作用の発現機構に関し、われわれは以前、細胞膜の過分極が重要な一因子であることを示した。今回さらに、patch clamp法による実験から、この過分極が、Ca^<2+>依存性K^+チャネルがcAMP依存性キナ-ゼによる燐酸化で活性化されることを介して起ることを強く示唆する知見が得られた。
3.人工的基質としてアルカリホスファタ-ゼなどの測定に広く使われているpーニトロフェニル燐酸(pNPP)が、PrPase(特に2A型)にも基質として使用しうることをOAを用いた実験から示した。従来、PrPase活性の測定においては、その調製、取扱いに煩雑さを伴う^<32>P-燐酸化蛋白が基質として用いられてきた。pNPPは、高純度のものが安価に入手でき、その脱燐酸化の過程は反応の結果生分光光度法で連続的かつ正確に追跡できるので、今後pNPPは、PrPase測定のための便利な基質として、有効に使用されるものと期待される。
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