| 研究課題/領域番号 |
01570125
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
医化学一般
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
渡辺 毅 東京大学, 医学部(病)・第一内科, 助手 (80158641)
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| 研究分担者 |
寺本 民生 東京大学, 医学部(病)第一内科, 助手 (20133077)
清水 孝雄 東京大学, 医学部栄養学, 助教授 (80127092)
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| 研究期間 (年度) |
1989 – 1990
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| 研究課題ステータス |
完了 (1990年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1990年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1989年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
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| キーワード | ロイコトリエン / 受容体 / 肺 / 蛋白可溶化 / 百日咳毒素 / GTP結合蛋白 / 卵母細胞 / 遺伝子クロ-ニング / ロイコトリエンD_4 / モルモット肺 |
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| 研究概要 |
本研究の目的は喘息等の病態の重要なメディエ-タ-であるロイコトリエン(LT)D_Δの肺の受容体の性質及び情報伝達機構を分子レベルで解明することであり、以下の二つの方法を用いた。
1)肺LTD_Δ受容体蛋白の生化学的追求
モルモット肺の膜分画よりLTD_Δ受容体、同時に脾臓のLTB_Δ受容体をさまざまの界面活性化剤を用いて活性の可溶化を試みた結果、CHAPSを用いて効率よく活性型のまま可溶化に成功した。この可溶化蛋白はカラムクロマトにより部分精製され、受容体蛋白は分子量約7万の糖蛋白であることが判明した。また、百日咳毒素を用いてこの受容体が百日咳毒素感受性のGTP結合蛋白と連関していることが証明された(文献1、2)。しかし、可溶化された受溶体活性は不安定で受容体蛋白の単一蛋白としての精製には至らなかった。
2)発現系を用いた受容体蛋白cDNAのクロ-ニング
モルモット肺より抽出したmRNAより作成したcDNAをλベクタ-に組み込みcDNAライブラリ-を作成した。またアフリカツメガエル卵母細胞に肺のmRNAを注入しLTD_Δに反応するCa^<2+>依存性のCl電流をvoltage clamp法にて感知する電気生理的方法によるスクリ-ニングにより受容体蛋白をコ-ドしたcDNAのクロ-ニングを試みた。肺LTD_Δ受容体のクロ-ニングは当該年度中には成功せず、現在進行中である。しかし、同じcDNAライブラリ-を用いて、血小板活性化因子(PAF)の遺伝子クロ-ニングに成功し、その核酸、アミノ酸配列、hydropathicity profileなどから受容
体蛋白の構造を明らかにした。また、COS細胞での受容体の発現にも成功している。(文献3)
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