前立腺潜在癌DNAの解析

研究課題

研究課題/領域番号	01570175
研究種目	一般研究(C)
配分区分	補助金
研究分野	人体病理学
研究機関	三重大学 (1990) 福井医科大学 (1989)
研究代表者	白石泰三三重大学, 医学部, 助教授 (30162762)
研究期間 (年度)	1989 – 1990
研究課題ステータス	完了 (1990年度)
配分額 *注記	2,100千円 (直接経費: 2,100千円) 1990年度: 300千円 (直接経費: 300千円) 1989年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
キーワード	前立腺癌 / 潜在癌 / 癌遺伝子 / 遺伝子増幅 / cーmyc / Hーras / Kiーras / DNA抽出 / ras癌遺伝子 / myc癌遺伝子 / AMex包理
研究概要	1.材料 AMex(Aceton Methylbenzoate Xylene包埋)法により組織標本を作成し病理学的検索がなされたのは84例で,各症例あたり平均で20個のブロックが作成された.このうち22例(26.2%)に潜在癌が発見された. 2.DNA抽出,分析 AMeX包埋前立腺組織の100μ厚の切片重量は脱パラフィン前で43ー56mgであり,脱パラフィンにより平均42%減少した.同切片からphenol法で48ー65μgのDNAを回収し,その収率は0.13ー0.15%であった.回収されたDNAはアガロ-ス電気泳動法により数十kb以上の高分子を多く含むことが確認された. 3.癌遺伝子増幅の検索上記により得られたDNA試料をナイロンメンブランに10μずつスポットし,ビオチン標識したDNA probeでhybridizeし,遺伝子増幅の有無を検討した.用いたprobeは cーmyc 3rd exon,cーHaーrasおよびcーKiーras癌遺伝子に対するもので,hybridizationの条件は42℃,overnight incubationで,使用したprobeの濃度はいずれも12.5μg/mlで,緩衝液は5XSSC,45%formamideを含むものである.発色はalkaliーphosphatase標識streptavidine/BCIP法を用いた.検索した全例でこれらの癌遺伝子の増幅はみられなかった。