| 研究課題/領域番号 |
01580162
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
物質生物化学
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
東城 博雅 大阪大学, 医学部, 助手 (90135707)
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| 研究期間 (年度) |
1989 – 1990
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| 研究課題ステータス |
完了 (1990年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1990年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
1989年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
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| キーワード | 膵臓型ホスホリパ-ゼA_2 / II群ホスホリパ-ゼA_2 / 主細胞 / 壁細胞 / リン脂質代謝 / 消化管 / 胃酸分泌 |
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| 研究概要 |
1.ラット胃粘膜可溶分画から精製したPLA_2のN末端アミノ酸配列、ペプチドマップ、免疫化学的性質は、ラット膵臓PLA_2と同一であった。胃粘膜cDNAライブラリ-から膵PLA_2cDNA断片をプロ-ブとして胃PLA_2cDNAを単離し、その塩基配列を決定したところ膵PLA_2cDNAの塩基配列と完全に一致していた。
2.胃粘膜膜分荷から可溶化後に精製したPLA_2のN末端アミノ酸配列、免疫化学的性質も膵PLA_2と同一であった。
3.胃粘膜には、膵臓型PLA_2以外にII群(マムシ毒型)PLA_2mRNAも比較的多量に存在するが、II群PLA_2の蛋白質としての発現量は、僅かでmRNAレベルと必ずしも相関していなかった。
4.ラット膵臓型PLA_2の高感度定量法としての酵素抗体法を開発した。
5.4.で開発した方法とPLA_2活性測定により、単離主細胞と壁細胞における膵臓型ホスホリパ-ゼA_2含量を調べた結果、PLA_2は、主に主細胞に存在し一部は壁細胞にも存在する。免疫電顕法により膵型PLA_2の分布を調べた結果、PLA_2を、主細胞の分泌顆粒と壁細胞の管腔側頂端膜の外側(intracellular canaliculi)及び頂端膜上に局在していた。
6.カルバコ-ル刺激により胃主細胞からペプシノ-ゲン同様に膵型PLA_2は、胃液中に分泌されることを証明した。
7.以上の結果から、胃粘膜の膵型PLA_2は、消化酵素として主細胞から分泌されることの他に、壁細胞の胃酸分泌過程における頂端膜リン脂質代謝に関与している可能性が示唆された。
8.II群PLA_2の一次構造を明らかにするためにラット脾臓cDNAライブラリ-からII群PLA_2cDNAを単離しその塩基配列を決定した。またII群PLA_2は、脾臓と肝臓のmononuclear phagocytic cellsに多く存在するので胃においてもII群PLA_2は粘膜固有層のマクロファ-ジに存在する可能性がある。
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