| 研究課題/領域番号 |
01580163
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
物質生物化学
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
開 祐司 大阪大学, 歯学部, 助手 (40144498)
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| 研究分担者 |
鈴木 不二男 大阪大学, 歯学部, 教授 (40028717)
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| 研究期間 (年度) |
1989 – 1990
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| 研究課題ステータス |
完了 (1990年度)
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| 配分額 *注記 |
2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
1990年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
1989年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
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| キーワード | 軟骨由来成長因子 / 軟骨細胞 / chondromodulinーI / 細胞分化 / 細胞増殖 / fibroblast growth factor / 細胞外基質 / 内軟骨性骨形成 / cDNAクロ-ニング / 精製 / アミノ酸配列 / プロテオグリカン合成 |
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| 研究概要 |
申請者らは、軟骨基質中に未知の成長因子(軟骨由来因子、CDF)が存在することを明らかにしてきた。本研究において、我々は、ウシ胎仔軟骨1Mグアニジン塩酸抽出物を出発材料として、アセトン分画・限外瀘過・分子篩クロマトグラフィ-・ヘパリンアフィニティ-クロマトグラフィ-・逆相クロマトグラフィ-の手法を駆使して、分子量約25kDaの生物活性因子(chondromodulinーI,ChMーI)の完全精製に成功した。精製ChMーIは、CDFに期待されるすベての生物活性を保持していた。つぎに、気相シ-クエンサ-により、ChMーIのNー末端27残基のアミノ酸配列を明らかにし、ChMーIのリジルエンドペプチダ-ゼ消化断片から、さらに21酸基のアミノ酸配列を明らかにした。これらのアミノ酸配列をもとに、ウシ胎仔軟骨cDNAからPCR法によりChMーIのNー末端部分に相当するcDNA断片(293bp)をクロ-ニングした。これをプロ-ブにしてノ-ザンブロットを行ない、ウシ骨端軟骨RNA中にChMーImRNA(約1.7kb)を同定した。興味深いことに、ChMーImRNAの発現は軟骨組織に特異的で、他の組織では全く発現されていなかった。次に、λgt10に組み込んだウシ胎仔骨端軟骨cDNAライブラリ-をスクリ-ニングして、完全長ChMーIcDNAをクロ-ニングして塩基配列を決定した。その結果、ChMーIは、121残基のアミノ酸よりなる糖蛋白質で2個のOー結合糖鎖と1個のNー結合糖鎖を有する。また、ChMーIは、335残基のアミノ酸より成る前駆蛋白質のCー末端部分として生合成され、ChMーI部分に先立つプロセシングシグナル(ArgーGluーArgーArg)部分で切断されて細胞外に分泌されるものと考えられる。
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