| 研究課題/領域番号 |
01580166
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
物質生物化学
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
岩永 貞昭 九州大学, 理学部, 教授 (90029942)
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| 研究分担者 |
太和田 勝久 九州大学, 理学部, 助教授 (20029507)
長谷 純宏 大阪大学, 理学部, 教授 (80028232)
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| 研究期間 (年度) |
1989
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| 研究課題ステータス |
完了 (1989年度)
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| 配分額 *注記 |
1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
1989年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
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| キーワード | 血液凝固VII因子 / 血液凝固IX因子 / 外因系凝固反応 / プロテインZ / 糖ペプチド / キシロ-ズ / グルコ-ス / 上皮細胞増殖成長因子(EGF) |
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| 研究概要 |
VIIとIX因子は、外因系凝固開始反応に関与するビタミンK依存性タンパク質である。申請者らは、昨年度、外因系凝固の開始反応機構を知る一歩として、ウシVII因子精製法に改良を加えるとともに、その全一次構造を決定した(Takeya,H.et al.(1988)J.Biol.Chem.263.14868-14877)。その際、VII因子より得られたSer-52を含むペンタペプチドの一次構造解析において、この残基がPTH-Serとして検出されないことに気付いた。同じことがウシIX因子のSer-53及びプロテインZのSer-53を含むペンタペプチドにおいても見い出された。そして、ウシVII、IX因子のSer-52、Ser-53がそれぞれプロセスされており、その修飾基はGlclモルとXy12モルから成る糖鎖であることを報告した。今回、ウシのEGF様第1ドメインのそれと同じ位置にSerを持つヒトIX、VII、Z、ウシZについて、同様な修飾があるかどうかを調べた。これらのタンパク質をS-アミノエチル化後、リシルエンドペプチタ-ゼ消化し、逆相HPLCにより相当する糖ペプチドを単離した。糖組成分析、質量分析の結果、ヒトIX因子、ウシプロテインZの修飾基は、Xyl/Glc(モル比)=1:1及び2:1から成る糖鎖を含んでいた。一方、ヒトVII因子とプロテインZの修飾基はXyl/Glc(モル比)=1:1と2:1から成る2種の糖鎖がそれぞれ存在し、不均一であった。更にヒトIX因子の糖鎖ペプチドをヒドラジン分解し、2-アミノピリジン(PA)で蛍光標識後、加水分解した結果、Ser-53と結合しているのはGlcであることが明らかとなった。また、ウシIX因子のPA-Glc-(Xyl_2)を部分水解したところ、PA-Glc-Xylを生成し、その糖鎖のHPLCでの溶出位置はヒトIX因子から遊離したPA-Glc-Xylのそれに一致した。以上の結果から、ヒトIX因子のEGF様第1ドメインに結合した糖鎖はXyl-Glc-Ser-53と推定した。
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