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生体物質及び病因物質の新しい超高感度測定法の開発に関する基礎的研究

研究課題

研究課題/領域番号 01580168
研究種目

一般研究(C)

配分区分補助金
研究分野 物質生物化学
研究機関宮崎医科大学

研究代表者

石川 栄治  宮崎医科大学, 医学部, 教授 (40029939)

研究期間 (年度) 1989 – 1990
研究課題ステータス 完了 (1990年度)
配分額 *注記
2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
1990年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1989年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
キーワード抗原 / 抗体 / ハプテン / 酵素免疫測定法 / 免疫測定法 / ペプチド / βーDーガラクトシダ-ゼ / ペルオキシダ-ゼ / 免疫複合体転移測定法 / β-D-ガラクトシダ-ゼ
研究概要

生体物質及び病因物質を超高感度で測定するために免疫複合体転移免疫測定法を開発した。2,4ージニトロフェニル(DNP)化ビオチン化免疫反応体、測定物質、標識免疫反応体を同時に反応させ、3者からなる免疫複合体を抗DNP抗体不溶化固相の上にトラップした。固相を洗浄した後、DNPーリジンにより免疫複合体を固相から溶出し、ストレプトアビジン不溶化固相の上に移し換え、固相上の標識を検出した。標識免疫反応体として大腸菌・βーDーガラクトシダ-ゼ標識アフィニティ-精製抗ヒト・フェリチンFab'を用いることにより、ヒト・フェリチンの1 milliattomole(1x 10^<ー21> mol、600分子)を検出することができた。同じ方法により、B型肝炎ウイルス表面抗原、ラット肝オルニチンδーアミノトランスフェラ-ゼなども超高感度で測定できることがわかった。標識免疫反応体として大腸菌・βーDーガラクトシダ-ゼ標識抗原あるいは西洋ワサビ・ペルオキシダ-ゼ標識抗原を用いることにより、抗インスリン抗体、抗サイログロブリン抗体などの測定を、赤血球凝集反応、ELISAなどの従来法と比べて2,000〜4,000倍高感度化することができた。この超高感度免疫複合体転移免疫測定法は、合成ペプチドあるいはリコンビナント蛋白を抗原とする抗HTLVー1抗体、抗HIV抗体の測定にも応用することができ、ゼラチン粒子凝集法、ウエスタンブロット法などの従来法では検出しえない低濃度の抗体を検出することができるので、これらのウイルス感染の診断に役立つことがわかった。これらの免疫複合体転移免疫測定法をさらに高感度化するために、免疫複合体を固相から固相へ2度転移させる方法を開発した。免疫反応体をジスルフィド・フルオレセインにより標識して、抗フルオレセイン抗体不溶化固相から還元により溶出した。この方法を小分子ペプチドの非競合測定法(ヘテロ・サンドイッチ法)に応用して、1attomoleあるいはそれ以下の検出が可能になりつつある。

報告書

(3件)
  • 1990 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1989 実績報告書
  • 研究成果

    (24件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (24件)

  • [文献書誌] Hiroaki Kohno,et al.: "Novel and sensitive enzyme immunoassay(immune complex transfer enzyme immunoassay for(antiーhuman Tーcell leukemia virus type I)IgG in human serum using recombinant gagーenv hybird protein as antigen." Journal of Clinical Laboratory Analysis. 4. 355-362 (1990)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Eiji Ishikawa,et al: "Novel and sensitive noncompetitive(twoーsite) immunoassay for haptens with emphasis on peptides." Clinical Biochemistry. 23. 445-453 (1990)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Seiichi Hashida,et al.: "Detection of one milliattomole of ferritin by novel and ultrasensitive enzyme immunoassay." Journal of Biochemistry. 108. 960-964 (1990)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Eiji Ishikawa,et al.: "Ultrasensitive enzyme immunoassay." Clinica Chimica Acta. 194. 51-72 (1990)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Takeyuki Kohno,et al.: "Immune cumplex transfer enzyme immunoassay for (antiーhuman Tーcell leukemia virus type I)IgG in serum using a synthetic peptide,env gp46(188ー209),as antigen." Journal of Clinical Laboratory Analysis. 5. 25-37 (1991)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Seiichi Hashida,et al.: "Timeーresolved fluorometric sandwich immunoassay for human growth hormone in serum and urine." Journal of Clinical Laboratory Analysis. 5. 38-42 (1991)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hiroaki Kohno, Takeyuki Kohno, Iwane Sakoda and Eiji Ishikawa: "Novel and sensitive enzyme immunoassay (immune complex transfer enzyme immunoassay for (anti-human T-cell leukemia virus type I) IgG in human serum using recombinant gag-env hybrid protein as antigen" Journal of Clinical Laboratory Analysis. 4. 355-362 (1990)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Eiji Ishikawa, Koichiro Tanaka, Seiichi Hashida, Ken'ichi Yamaguchi and Takeshi Uno: "Novel and sensitive noncompetitive (two-site) immunoassay for haptens with emphasis on peptides." Clinical Biochemistry. 23. 445-453 (1990)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Seiichi Hashida and Eiji Ishikawa: "Detection of one milliattomole of ferritin by novel and ultrasensitive enzyme immunoassay." Journal of Biochemistry. 108. 960-964 (1990)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Eiji Ishikawa, Seiichi Hashida, Takeyuki Kohno and Kouichi Hirota: "Ultrasensitive enzyme immunoassay." Clinica Chimica Acta. 194. 51-72 (1990)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Takeyuki Kohno, Iwane Sakoda and Eiji Ishikawa: "Immune complex transfer enzyme immunoassay for (anti-human T-cell leukemia virus type I) IgG in serum using a synthetic peptide, env gp46 (188-209), as antigen." Journal of Clinical Laboratory Analysis. 5. 25-37 (1991)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Seiichi Hashida, Koichiro tanaka, Shinobu Inoue, Kunio Hayakawa and Eiji Ishikawa: "Time-resolved fluorometric sandwich immunoassay for human growth hormone in serum and urine." Journal of Clinical Laboratory Analysis. 5. 38-42 (1991)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hiroaki Kohno,et al.: "Novel and sensitive enzyme immunoassay(immune complex transfer enzyme immunoassay for(antiーhuman Tーcell leukemia virus type I)IgG in human serum using recombinant gagーenv hybrid protein as antigen." Journal of Clinical Laboratory Analysis. 4. 355-362 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Eiji Ishikawa,et al.: "Novel and sensitive noncompetitive(twoーsite)immunoassay for haptens with emphasis on peptides." Clinical Biochemistry. 23. 445-453 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Seiichi Hashida,et al.: "Detection of one milliattomole of ferritin by novel and ultrasensitive enzyme immunoassay." Journal of Biochemistry. 108. 960-964 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Eiji Ishikawa,et al.: "Ultrasensitive enzyme immunoassay." Clinica Chimica Acta. 194. 51-72 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Takeyuki Kohno,et al.: "Immune complex transfer enzyme immunoassay for(antiーhuman Tーcell leukemia virus type I)IgG in serum using a synthetic peptide,env gp46(188ー209),as antigen." Journal of Clinical Laboratory Analysis. 5. 25-37 (1991)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Seiichi Hashida,et al.: "Timeーresolved fluorometric sandwich immunoassay for human growth hormone in serum and urine." Journal of Clinical Laboratory Analysis. 5. 38-42 (1991)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Koichiro Tanaka,et al.: "Elimination of human chorionic gonadotropin in sandwich enzyme immunoassay for human thyroid-stimulating hormone in serum." Analytical Letters. 22. 2471-2483 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Takeyuki Kohno,et al.: "Specific enzyme immunoassay for α-fetoprotein from hepatocellular carcinoma." Journal of Clinical Laboratory Analysis. 4. 74-78 (1990)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Seiichi Hashida,et al.: "Highly sensitive two-site enzyme immunoassays for human atrial natriuretic polypeptides." Peptides. (1990)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Takeyuki Kohno,et al.: "Novel and sensitive enzyme immunoassay(immune complex transfer enzyme immunoassay)for α-fetoprotein from hepatocellular carcinoma." Journal of Clinical Laboratory Analysis. (1990)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Koichiro Tanaka,et al.: "Novel and sensitive noncompetitive enzyme immunoassay for arginine vasopressin." Clinical Chemistry and Enzymology Communications. (1990)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Eiji Ishikawa,et al.: "Novel and sensitive noncompetitive(two-site)immunoassay for haptens with emphasis on peptides." Clinical Biochemstry. (1990)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書

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公開日: 1989-04-01   更新日: 2016-04-21  

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