研究課題/領域番号 |
01580202
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研究種目 |
一般研究(C)
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配分区分 | 補助金 |
研究分野 |
代謝生物化学
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研究機関 | 藤田保健衛生大学 |
研究代表者 |
伊藤 正樹 藤田保健衛生大学, 医学部, 講師 (50116779)
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研究分担者 |
小川 久光 藤田保健衛生大学, 医学部, 助教授 (80101658)
高木 康敬 藤田保健衛生大学, 医学部, 教授 (50037313)
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研究期間 (年度) |
1989 – 1990
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研究課題ステータス |
完了 (1990年度)
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配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1990年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1989年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
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キーワード | ウリカ-ゼ / 尿酸 / 遺伝子構造 / 分子進化 / 尿酸分解 / 遺伝子発現 / 分子生物学 |
研究概要 |
本研究課題を実施するために、各生物種におけるウリカ-ゼ発現のちがいに注目した。すなわち、ニワトリにおいて初期胚の時期にのみ発現していると考えられるウリカ-ゼの存在を、抗ラット肝ウスカ-ゼ抗体との交叉反応やラット肝ウリカ-ゼcDNAとの相同性により明らかにすることを試みた。それらの交叉産物やcDNAの存在はニワトリ胚で認めることはできたが、ウリカ-ゼの発現量が微量であるため、アミノ酸配列を決定し、確認することが困難であった。そこでウリカ-ゼが成体で発現しているラットに注目し、その遺伝子構造を明らかにして、遺伝子レベルでウリカ-ゼの分子進化を考えることとした。ラットウリカ-ゼ遺伝子分離のためには、我々が既に分離したラット肝ウリカ-ゼcDNAをプロ-ブにして、遺伝子ライブラリ-のスクリ-ニングを行い5つのクロ-ンを分離した。その結果、ラットウリカ-ゼ遺伝子は、8エクソンで構成され、全長40Kbに及ぶことが明らかになった。更に、サザン法による解析により、ラットウリカ-ゼ遺伝子は単一遺伝子であることが示唆され、各生物種のウリカ-ゼ遺伝子を考える上で興味深い。エクソンーイントロン境界領域はGT/AGル-ルに従っており、第8エクソンには、ポリA付加シグナルの下流25塩基に3'側スプライシングシグナルが存在していた。転写開始点はプライマ-伸長法とS1マッピング法により決定し、翻訳開始メチオニンコドンの上流55塩基であることを明らかにした。更に転写開始点の上流200塩基までの領域に、TATA配列,CAAT配列及びダイレクトリピ-トで囲まれたパリンドロ-ム配列が見られた。これらの典型的なプロモ-タ-構造が、ウリカ-ゼの肝特異的発現に関与している可能性がある。
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