| 研究課題/領域番号 |
01580249
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
分子遺伝学・分子生理学
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| 研究機関 | 筑波大学 |
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研究代表者 |
饗場 弘二 筑波大学, 化学系, 助教授 (20025662)
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| 研究期間 (年度) |
1989
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| 研究課題ステータス |
完了 (1989年度)
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| 配分額 *注記 |
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1989年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
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| キーワード | 転写終結領域 / 逆くり返し配列 / mRNAの安定性 / CRP / crp遺伝子 |
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| 研究概要 |
1)プラスミド上にクロ-ン化した大腸菌crp遺伝子の3′フランキング領域にある逆くり返し配列の一部を欠失した変異遺伝子を作製した。これらの欠失は、DNA配列を決定することにより確認した。
2)変異crpを菌内に導入し、合成されるCRP量を、CAMP結合能の測定およびPAGEにより解析したところ、変異crpから合成されるCRP量は、野生型の約1/3に低下していることが明らかになった。
3)SIアッセイにより、crpmRNA量を解析した結果、変異crpのmRNA量は、野生型に比べ1/3量に低下していた。
4)SIアッセイにより、crpmRNAの安定性を解析したところ、変異型crpのmRNAの半減期は、野生型に比べ約1/2に低下していた。
5)ノ-ザンブロッティングにより、crpmRNAのサイズを解析した結果、野生型では、逆くり返し配列部分で終結したRNAが大多数であるのに対し、変異型では、それより大きな転写産物が検出された。このことは逆くり返し配列が転写のタ-ミネ-タ-として機能していることおよび逆くり返し配列の欠失はタ-ミネ-タ-の機能を阻害し転写のリ-ドスル-をひきおこしていることを示している。
6)上記の結果から、crpタ-ミネ-タ-は、転写終結機能とともに、mRNAの安定化により、遺伝子発現の正の制御因子としても働いていることが明らかになった。
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