無細胞転写系におけるチトクロ-ムP-450c遺伝子発現調節の分子機構の解析

• 研究課題/領域番号: 01635503
• 研究種目: 重点領域研究
• 配分区分: 補助金
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 半田 宏 東京大学, 医学部(医), 助教授 (80107432)
• 研究期間 (年度): 1989 – 1990
• 研究課題ステータス: 完了 (1989年度)
• 配分額: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円); 1989年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
• キーワード: チトクロ-ムP-450c / メチルコラントレン / 無細胞転写系 / アデノウイルスEIA遺伝子 / プロモ-タ- / エンハンサ- / 転写調節 / 転写因子

研究概要

チトクロ-ムP-450c遺伝子はメチルコラントレンで誘導発現される。その誘導発現はDNA上のエンハンサ-およびプロモ-タ-領域に存る特量塩基配列とそれらを認識して特量的に結合する転写因子により調節されている。更に、その誘導発現はアデノウイルスEIA遺伝子産物により抑制されることを我々は見つけた(Eur.J.Biochem,181,539-544,1989)。本研究の目的はそれら種々の転写調節に関与している転写因子を同定、分離し、それら因子の相互作用による転写調節機構を解明することにある。無細胞転写系を用いて、チトクロ-ムP-450c遺伝子上の-44〜-53領域が転写活性に必要であることを示し、それに結合する転写因子を同定した。我々はDNAの特異塩基配列に結合する転写因子を迅速に効率良く分離、精製する手段として、DNAアフィニティ・ラテックス粒子を独自に開発し、その粒子を用いて転写因子の一つであるE4TF3を精製することに成功した(Nucleic Acids Res.17,6229-6240,1989)。この3法を用いて、チトクロ-ムP-450c遺伝子のエンハンサ-領域に有る特異塩基配列(XRE)に結合する転写因子を精製するためにXREの塩基配列を人工合成し、そのDNAをラテックス粒子に結合した。今後、このDNAアフィニティ-・ラテックス粒子を用いてXREに結合する転写因子を精製すると共に、EIA蛋白質による転写抑制機構を明らかにするつもりでいる。

研究成果

• [文献書誌] K.Sogawa et al.: "Repression of cytochrome P-450c gene expression by the adenovirus E1a gene products" Eur.J.Biochem.181. 539-544 (1989)
• [文献書誌] S.Ooyama et al.: "Transcription in the reverse orientation at either terminus of the adenovirus type 5 genome" EMBO J.8. 863-868 (1989)
• [文献書誌] H.Handa et al.: "Effect of DNA supercoiling on transcription from the adenovirus early region 4." FEBS Lett.249. 17-20 (1989)
• [文献書誌] H.Kawaguchi et al.: "Purification of DNA-binding transcription factors by their selective adsorption on the affinity latex particles." Nucleic Acids Res.17. 6229-6240 (1989)
• [文献書誌] H.Watanabe et al.: "Transcription factor E4TF1 contains two subunits with different functions." EMBO J.
• [文献書誌] T.Wada et al.: "Strain-specific lethal effect of the adenovirus Ela proteins on Saccharomyces cerevisiae." J.Virol.