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PDGF受容体およびT細胞受容体を介するホスホリパ-ゼCの活性化機構

研究課題

研究課題/領域番号 01641535
研究種目

重点領域研究

配分区分補助金
研究機関札幌医科大学

研究代表者

佐々木 輝捷  札幌医科大学, がん研究所, 教授 (00045494)

研究分担者 遠藤 俊明  札幌医科大学, がん研究所, 助手 (90213595)
佐々木 洋子  札幌医科大学, がん研究所, 講師 (60045424)
研究期間 (年度) 1989
研究課題ステータス 完了 (1989年度)
配分額 *注記
1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
1989年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
キーワード血小板由来成長因子 / ラス遺伝子 / ラスp21タンパク質 / 細胞内遊離Ca^<2+>濃度 / ホスホリパ-ゼC
研究概要

ラット繊維芽細胞WFBは、血小板由来成長因子(PDGF)、バソプレシン、ボンベシンおよびPGF_<2α>の刺激に応答し、細胞内遊離Ca^<2++>濃度([Ca^<2+>]i)の上昇とホスファチジルイノシト-ル4,5ビスリン酸(PIP_2)のホスホリパ-ゼC(PLC)による加水分解を起こす。活性化C-Ha-ras遺伝子でトランスフォ-ムしたWFB細胞では、PDGF刺激に対する[Ca^<2+>]i上昇応答が特異的に消失した。この消失は、ras癌遺伝子による癌化で特異的見られる現象であり、ポリオ-マミドルTにより癌化したWFBでは消失しない。Ras癌遺伝子のコ-ドするras p21タンパク質がどのような機構によりPDGF受容体を介するPLCの活性化に干渉するのかを明らかにする目的で、精製したras p21タンパク質をWFB細胞に導入する実験を行った。12番目にバリンを有する活性化C-Ha-ras p21タンパク質は、合成遺伝子の発現ベクタ-pHR-L9を大腸菌に発現させたものから精製した。ras p21タンパク質をWFB細胞に加え、scrape-loadingにより細胞にras p21タンパク質を封入した。ras p21タンパク質を封入すると、細胞の接着性が増大し、20時間保温する間に細胞数も増加した。それに伴い、PDGF刺激によるイノシト-ルリン酸の生成応答が、牛血清アルブミンを封入した対照細胞に比較して小さくなった。このようなrasタンパク質の効果は、C端8コのアミノ酸が欠落したras p20タンパク質では認められなかった。ras p21タンパク質をscrape-loadingした後、3時間後に膜画分を調整しイノシト-ル脂質の分解を検討した所、グリセロホスホイノシト-ル生成の亢進が認められた。ストレプトリジンO処理によりタンパク質に対し透過性を持たせたWFB細胞を用いて、PDGF刺激及びバソプレシン刺激に伴うイノシト-ルリン酸生成応答に対するras p21タンパク質の効果を検討したが、効果は認められなかった。

報告書

(1件)
  • 1989 実績報告書
  • 研究成果

    (6件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (6件)

  • [文献書誌] Watanabe,H.,Tanaka,S.,Akino,T.,and Hasegawa-Sasaki,H.: "Evidence for coupling of different receptors for gonadotropin-releasing hormone to phospholipases C and A_2 in cultured rat luteal cells" Biochem.Biophys.Res.Commun.in press. (1990)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Abe,A.,and Sasaki,T.: "Sulfhydryl groups in glycolipid transfer protein:formation of an intramolecuar disulfide bond and oligomers by Cu^<2+>-catalyzed oxidation" Biochim.Biophys.Acta.985. 38-44 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Abe,A.,and Sasaki,T.: "Formation of an intramolecular disulfide bond of glycolipid transfer protein" Biochem.Biophys.Acta.985. 45-50 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Sasaki,T.: "Glycolipid transfer protein and intracellular traffic of glucosylceramide" Experientia. (1990)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Sasaki,T.and Abe,A.(Edited by V.Ginsburg): "Methods in Enzymology,Vol.179 Chapter 46:Glycolipid Transfer Protein from Pig Brain" Academic Press, 639(559-566) (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Sasaki,T.,Abe,A.,and Roerink,F.(Edited by H.J.Hilderson): "Subcellular Biochemistry,Vol.16" Plenum Publishing Corporation, (1990)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書

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公開日: 1989-04-01   更新日: 2016-04-21  

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