大腸菌ゲノムの全体像・ゲノムの機能的全体像

• 研究課題/領域番号: 02237104
• 研究種目: 重点領域研究
• 配分区分: 補助金
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 中田 篤男 大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (80029769)
• 研究分担者: 由良 隆 京都大学, ウイルス研究所, 教授 (20027311) ; 松橋 通生 東京大学, 応用微生物研究所, 教授 (40013297) ; 二井 将光 大阪大学, 産業科学研究所, 教授 (50012646) ; 饗場 弘二 筑波大学, 化学系, 助教授 (20025662) ; 安楽 泰弘 東京大学, 理学部, 教授 (20012643)
• 研究期間 (年度): 1990 – 1991
• 研究課題ステータス: 完了 (1990年度)
• 配分額: 28,000千円 (直接経費: 28,000千円); 1990年度: 28,000千円 (直接経費: 28,000千円)
• キーワード: リン酸レギュロン / CRPレギュロン / <cyo>___ーオペロン / 鞭毛レギュロン / SSBレギュロン / H^+ーATPase / 細胞の成長と分裂 / 熱ショック・プロモ-タ-

研究概要

本研究班は,「大腸菌ゲノムの全体像」の中で「ゲノムの機能的全体像」を分担している.すなわち,大腸菌の遺伝子群の機能とその発現制御系のネットワ-クを拡大していって,ゲノム全体の機能を明らかにすることが最終の目標である.本年度,遺伝子発現に関して中田と牧野はリン酸レギュロンに属する<phn>___ーオペロン(炭素ーリン・リア-ゼを含む)がペリプラズム中の結合蛋白質に依存した能動輸送系を含み,Kー12株では機能していないこと,また,PhoMがPhoMーORF2とPhoBをリン酸化すること(cross talk)を明らかにした.饗場は8個のCRPーcAMP感受性プロモ-タ-の染色体上の座位と塩基配列を決定し,CRPの転写終結配列がmRNAを安定化して遺伝子発現を正に調節することを証明した.安楽は<cyoABCDE>___ーオペロン(チトクロ-ムb__ー_<562>ーo__ー複合体)をクロ-ニングし,その発現調節と好気的呼吸鎖でプロトンポンプとして働く本酵素複合体の機能の解析を行った.沓掛は鞭毛遺伝子クラスタ-の領域Iの上流部分の塩基配列を決定し,鞭毛形成に必須の遺伝子を発見した.また,領域IIIの<fliA>___ーー<fliB>___ーの間にも新しい遺伝子を発見した.嶋本は一本鎖DNA結合蛋白質(SSB)が遺伝子発現調節との関係で細胞内である濃度に保たれる機構を明らかにしつつある.二井はヌクレオチド関連蛋白質の共通ドメインに突然変異を導入してH^+ーATPaseの活性中心の構造を解析し,また,H^+に対してゲ-ト機能をもつサブユニットについても同様の解析を行った.松橋は細胞の成長と分裂に関与する<mra>___ー領域(遺伝子地図上2分)の<mraY>___ー,<ftsW>___ー,<murCDEFG>___ーと<mre>___ー領域(同71分)の<orfEF>___ーの全塩基配列を決定し,<mraY>___ー,<murD>___ー,<mreCD>___ーの機能を明らかにした.由良は熱ショック遺伝子発現誘導の初期反応の一つがシグマー32合成の翻訳レベルの脱抑制で,それにはmRNAの二次構造が重要な役割を果たすこと,また,ATP依存プロテア-ゼの調節サブユニット<clpA>___ーのアナログである<clpB>___ーも熱ショックプロモ-タ-をもつことを明らかにした.

研究成果

• [文献書誌] Yamada,M.,K.Makino,H.Shinagawa,and A.Nakata.: "Regulation of the the phosphate regulon of <Escherichia>___ー <coli>___ー:propterties of <phoR>___ー deletion mutants and subcellular localization of PhoR protein." Mol.Gen.Genet.220. 366-372 (1990)
• [文献書誌] Amemura,M.,K.Makino,H.Shinagawa,and A.Nakata.: "Cross talk to the phosphate regulon of <Escherichia>___ー <coli>___ー by Phom protein:PhoM is a histidine protein kinase and catalyzes phosphorylation of PhoB and PhoMーopen reading frame 2." J.Bacteriol.172. 6300-6307 (1990)
• [文献書誌] Nakamura,H.,I.Yamato,Y.Anraku,L.Lemieux,and R.B.Gennis.: "Expression of <cyoA>___ー and <cyoB>___ー demontrates that the COーbinding heme component of the <Escherichia>___ー <coli>___ー cytochrome o__ー comples is in subunit I." J.Biol.Chem.265. 11193-11197 (1990)
• [文献書誌] Minagawa,J.,H.Nakamura,I.Yamato,T.Mori,and Y.Anraku.: "Transcriptional regulation of the cytochrome b__ー_<562>‥o complex in <Escherichia>___ー coli:gene expression and molecular characterization of the promoter." J.Biol.Chem.265. 11198-11203 (1990)
• [文献書誌] Ushida,C.,and H.Aiba.: "Helical phase dependent action of CRP:effect of the distance between the CRP site and the ー35 region on promoter activity." Nuclic Acids <Res.>___ー. 18. 6325-6330 (1990)
• [文献書誌] Ohnishi,K.,K.Kutsukake,H.Suzuki,and T.Iino.: "Gene <fliA>___ー encodes an alternative sigma factor specific for flagellar operons in <Salmonella>___ー <typhimurium>___ー." Mol.Gen.Genet.221. 139-147 (1990)
• [文献書誌] Iwamoto,A.,J.Miki,M.Maeda,and M.Futai.: "H^+ーATPase γ subunit of <Escherichia>___ー <coli>___ー." J.Biol.Chem.265. 5043-5048 (1990)
• [文献書誌] Takeyama,M.,K.Ihara,Y.Moriyama,T.Noumi,K.Ida,N.Tomioka,A.Itai,M.Maeda,and M.Futai.: "The glycineーrich sequence of the β subunit of <Escherichia>___ー <coli>___ー H^+ーATPase is important for activity." J.Biol.Chem.265. 21279-21284 (1990)
• [文献書誌] Ikeda,M.,M.Wachi,F.Ishino,and M.Matsuhashi.: "Nucleotide sequence involving <murD>___ー and an open reading frame ORFーY spacing <murF>___ー and <ftsW>___ー in <Escherichia>___ー <coli>___ー." Nucleic Acids Res.18. 1058 (1990)
• [文献書誌] Ikeda,M.,M.Wachi,H.K.Jung,F.Ishino,and M.Matsuhashi.: "Nucleotide sequence involving <murG>___ー and <murC>___ー in the <mra>___ー gene cluster region of <Escherichia>___ー <coli>___ー." Nucleic Acids Res.18. 4041 (1990)
• [文献書誌] Ikeda,M.,M.Wachi,H.K.Jung,F.Ishino,and M.Matsuhashi.: "Homology among MurC,MurD,MurE and MurF proteins of <Escherichia>___ー coli and that between E__ー.<coli>___ー MurG and a possible MurG protein of <Bacillus>___ー <subtilis>___ー." J.Gen.Appl.Microbiol.36. 179-187 (1990)
• [文献書誌] Kitagawa,M.,C.Wada,S.Yoshioka,and T.Yura.: "Expression of <clpB>___ー,an analogue of ATPーdependent protease subunit regulatory in E__ー.<coli>___ー,is controlled a heat shock σ factor (σ^<32>)." J.Bacteriol.(1991)
• [文献書誌] Matsuhashi,M.,A.N.Pankrushina,M.Ikeda,M.Wachi,and F.Ishino.: "Septum peptidoglycan synthesis <in vitro>___ー in <Escherichia>___ー <coli>___ー:reconstitution of the PBP3ーFtsW system on the membranes.H.Kleinkauf and H.v.Do^^¨hren (ed.)," 50 Years of Penicillin Application., (1991)
• [文献書誌] Matsuhashi,M.,F.Ishino,M.Ikeda,H.K.Jung,M.Ueki,A.N.Pankrushina,S.Tomioka,Y.Okada,M.Wachi,and M.D.Song.: "Function of penicillinーbinding proteins and their regulation.H.Kleinkauf and H.v.Do^^¨hren (ed.)," 50 Years of Penicillin Application., (1991)