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ヒト染色体ディセクションによる外骨腫(がん抑制)遺伝子単離と腫瘍抑制機構

研究課題

研究課題/領域番号 02262103
研究種目

重点領域研究

配分区分補助金
研究機関長崎大学

研究代表者

新川 詔夫  長崎大学, 医学部, 教授 (00111170)

研究分担者 孫田 信一  愛知県心身障害者コロニー発達障害研究所, 遺伝学部, 主任研究員 (00100165)
陣野 吉廣  長崎大学, 医学部, 助手 (20179097)
研究期間 (年度) 1990
研究課題ステータス 完了 (1990年度)
配分額 *注記
9,000千円 (直接経費: 9,000千円)
1990年度: 9,000千円 (直接経費: 9,000千円)
キーワード染色体ミクロ切断 / がん抑制遺伝子 / 外骨腫遺伝子 / 遺伝子クロ-ニング / in situ hybridization
研究概要

<1.染色体顕微鏡切断・微量DNAクロ-ニング法の改良>___ー:(1)染色体標本作製時における短時間細胞固定および迅速分染、(2)切断片の乾燥状態での集積と微量(1nl)のproteinase K溶液・phenol/chloroformを用いたDNA抽出法の導入、(3)制限酵素NlaIIIに代わるSau3AIの採用による染色体DNAの消化、(4)染色体Sau3AI断片5'端に相補的な10mer linkerとそれに相補的な20mer primerの導入によるPCR、(5)psoralenー紫外線照射法の開発による汚染DNA混入防止、などの新しい手法の導入あるいは開発により、(1)では従来の染色体作製方法において生ずる染色体DNAの脱プリンやnickingを最小限に抑えること、(2)ー(5)ではクロ-ン取得効率の増大、PCR前及びその最中に生ずる汚染あるいは由来不明DNA混入を減少させることが可能になった。
<2.クロ-ンが8番染色体由来であることの検証>___ー:46個のクロ-ンをランダムに選択しプロ-ブとして、サザン法によりヒト全ゲノムDNA、ヒト8番染色体のみを含むヒト・マウス雑種細胞、およびマウス細胞とのhybridizationシグナルを調べた。46個中9個のクロ-ンでシグナルを検出した。うち6個はsingleーcopy DNAで、残りはrepetitive DNAであった。8q23ーq24のdissectionで得たPCR産物(2ug)をbiotinated duTPでラベルし、100ー500倍量のヒト全ゲノムDNAとの競合hybridizationの後、染色体上でfluorescence in situ hybridizationを行い、avidinーFITCと結合させた。8q23ーq24部位にFITCスポットを検出した。即ち、これらのクロ-ンは外骨腫遺伝子断片を含んでいる可能性が高い。
<3.陽性クロ-ンを用いたヒトゲノムDNAライブラリ-のスクリ-ニング>___ー:上記の陽性クロ-ンをプロ-ブにして、プラ-クhybridizationを行った。10万個のプラ-ク中陽性シグナルを2個に認めた。現在、このクロ-ンを用いてTRPS患者DNAを解析中である。

報告書

(1件)
  • 1990 実績報告書
  • 研究成果

    (7件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (7件)

  • [文献書誌] 陣野 吉廣,新川 詔夫: "PCRを用いた染色体特定領域DNAの直接クロ-ニング法ーmicrodissectionーmicrocloning法ー" 実験医学. 8. 1052-1057 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] 新川 詔夫: "PCRの原理とその応用ーPCRを利用した微量DNA材料からのクロ-ニング:マイクロディセクションで得た染色体DNAからのクロ-ニング" Cell Science. 6. 377-383 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Jinno,Y.,Yoshiura,K.,Niikawa,N.: "Use of psoralen as extinguisher of contaminated DNA in PCR." Nuleic Acids Research. 18. 6739 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] jinno.Y.,Hirota,T.,Harada,N.,Niikawa,N.: "A sinple and efficient anplification method of DNA with unkuwn seguenees." Nuleic Acids Research.

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Niikawa,N.,Deng,HーX.,Abe,K.,Harada,N.,et al.: "Possible mapping of the gene for transient myeloproliferative syndrome at 21q11.2." Human Genetics.

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Hamabe,J.,Harada N,Abe K,Fukushima Y,et al.: "A molecular study of the PrederーWilli syndrome:Deletion,RFLP and phenotype analyses on 50 patients." American Journal of Medical Genetics.

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] 新川 詔夫 (分担執筆): "がんのバイオサイエンス" 東京大学出版会, (1991)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書

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公開日: 1990-04-01   更新日: 2016-04-21  

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