| 研究課題/領域番号 |
02404020
|
|---|
| 研究種目 |
一般研究(A)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究分野 |
解剖学一般
|
|---|
| 研究機関 | 京都大学 |
|---|
研究代表者 |
藤本 和 京都大学, 医学部, 講師 (50159125)
|
|---|
| 研究分担者 |
酒井 眞弘 京都大学, 医学部, 助手 (40183363)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1990 – 1991
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1991年度)
|
| 配分額 *注記 |
25,100千円 (直接経費: 25,100千円)
1991年度: 4,000千円 (直接経費: 4,000千円)
1990年度: 21,100千円 (直接経費: 21,100千円)
|
|---|
| キーワード | フラクチャ-フリップ / フラクチャ-フリップ細胞化学 / 細胞膜 / 赤血球 / 核膜 / 核膜孔 / スペクトリン / バンド3蛋白 / マクロファ-ジ / 細胞接着 / フィブロネクチン |
|---|
| 研究概要 |
近年、フラクチャ-フリップ法と呼ばれる凍結割断技術が考察され、nmオ-ダ-での細胞膜表面巨分子構築の電子顕微鏡(以下電顕)解析が可能になった。本法は、凍結割断によって露出された細胞膜の疎水性部分を炭素蒸着することによって、細胞膜を物理的に固定し、細胞を融解、洗浄後、炭素固定された細胞膜を電顕用グリッドに回収し、再びその親水性表面に白金蒸着を行い、電顕下で観察する。本申請研究では、種々の細胞や細胞内小器官の膜構造をフラクチャ-フリップ法を用い、高分解能観察を行うとともに、主要膜蛋白の細胞化学的検索を試みた。以下、例として、赤血球膜および肝細胞核膜の結果を略述する。
[ヒト赤血球]同一レプリカ膜で、多数の赤血球膜の外側および内側表面の観察が可能であった。内側表面にスペクトリンの免疫反応陽性の網目状構造が明瞭に観察された。炭素蒸着膜をTriton処理に引き続き、アルカリ溶液等で処理した試料では、網目状構造が消失し、細胞質側真表面が観察された。赤血球膜外側表面が比較的平滑であるのに比べて、細胞質側真表面には直径8ー10nmの膜粒子が多数存在し、一部の粒子にバンド3の免疫コロイド金の標識が認められた。[ラット肝細胞から単離した核膜]膜に付着したリボゾ-ムと明瞭なサブユニット構造をもつ核膜孔複合体が観察された。レクチンの一種であるWGAを標識したコロイド金でレプリカ膜を染色すると、核膜孔の中心部に特異的に結合した。この所見は核膜孔にNーacetylglucosamine residueが存在することを示す。以上の結果は凍結割断、炭素蒸着されたmembrane halvesは細胞膜の形態学的観察のみならず抗原性の残存に優れていることから、膜蛋白の細胞化学的観察に良好な試料であることを示唆している。
|
